Estrategias de oxidación de la toxina sintética Delta-ctenitoxin-Pn2a de Phoneutria nigriventer para su aplicación como inmunógeno en el proceso de producción del antiveneno

JA RODRIGUEZ; G ACOSTA; GR BARREDO VACCHELLI; F ALBERICIO; SA CAMPERI

Simposio; IV International Meeting on Health Innovation IV INOVATEC 2023; 2023

Para la producción de antídoto contra la araña Phoneutria nigriventer, se extrae su veneno para la posterior inmunización de caballos y obtención de los anticuerpos purificados. El principal responsable de los síntomas de envenenamiento en humanos es la δ-ctenitoxinPn2a. Su síntesis química permitirá su aplicación en la producción de antisueros. La toxina presenta 6 puentes disulfuro y un nudo de Cys. En el presente trabajo se ensayaron diferentes estrategias de oxidación, que es la etapa sintética clave. δ-Ctenitoxin-Pn2a se obtuvo por síntesis química en fase sólida utilizando la química Fmoc/tBu en un sintetizador de microondas. Para su oxidación se compararon diversas estrategias: a) en ausencia de agentes oxidantes; b) agregando glutatión reducido y/o oxidado (GSH/GSSG), con o sin glutamina, urea, EDTA o arginina en diferentes buffers alcalinos; c) con el uso de agentes oxidantes inmovilizados en soporte sólido. La evaluación se realizó por RP-HPLC y espectrometría de masas por ionización por electrospray demostrando que las mejores opciones fueron: a) buffer Tris-acetato 0,1M/GSH 1mM/GSSG 0,1mM/EDTA 1μM/ con o sin urea 0,8M y b) PBS/GSH 3mM/GSSG 1mM/NaCl 150mM/ EDTA 1mM/ 50mM arginina. La toxina se está evaluando como inmunógeno para la obtención de antisueros como método alternativo al uso de veneno completo.