INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Selección de péptidos con afinidad por rhGH a partir de bibliotecas combinatorias.
Autor/es:
M.M. MARANI; M. C. MARTÍNEZ-CERON; G. FORNO; F. ALBERICIO; O. CASCONE; S. A. CAMPERI
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Exposicin; 6° Congreso y exposición para la industria farmacéutica y afines (ETIF 2010).; 2010
Institución organizadora:
ETIF. S:A:
Resumen:
La rhGH se indica tanto en tratamientos para niños con retraso en el crecimiento por déficit como en adultos cuyo déficit es causado por disfunciones hormonales (a nivel de la hipófisis o el hipotálamo), Insuficiencia Renal Crónica, Síndrome de Turner o Síndrome de Prader Willy. Debido a que su administración como biofármaco es parenteral, el grado de pureza debe superar el 99%, por lo tanto, el downstream processing (recuperación y purificación) es el paso crítico en su proceso de producción, representando más del 60-70% del costo operacional del bioproceso. Esto lleva a búsquedas de técnicas de purificación con mayores rendimientos y más económicas. La cromatografía de afinidad (AC) es capaz de cumplir en un solo paso el objetivo de maximizar la pureza y el rendimiento, por lo que es considerado el método más eficiente para el aislamiento y purificación de proteínas en mezclas complejas. A su vez, la alta afinidad ligando-proteína permite una utilización eficiente de la matriz cromatográfica con sobrenadantes de cultivo donde la proteína de interés se encuentra en muy baja concentración, como es el caso de la rhGH. Los péptidos cortos son ideales como ligandos para separaciones industriales por ser económicos, de alta estabilidad y fácil manufactura. En este trabajo se sintetizó una biblioteca combinatoria de nona-péptidos XXOXXOOOO (O=posiciones fijas y X=posicione variables, siendo X todos los aminoácidos naturales excepto Cys, Met y Trp) mediante el método de Dividir-Acoplar-Recombinar que permite obtener todas las combinaciones posibles de aminoácidos en la forma ?una bolilla-un péptido?, pudiendo seleccionar péptidos con afinidad mediante un screening. En nuestro laboratorio hemos diseñado una estrategia de identificación de los péptidos seleccionados basada en el uso de MALDI-TOF-MS y el linker ácido 4-(hidroximetil) benzoico (HMBA) que es rápida y económica. Mediante esta metodología hemos logrado seleccionar más de 50 péptidos con afinidad por la rhGH que muestran entre sí un consenso en los aminoácidos presente en cada posición variable (X). Este tipo de péptidos podrían usarse no solo como ligandos de afinidad para el desarrollo de nuevas estrategias de AC para la purificación de rhGH terapéutica de alto valor comercial sino también como ligandos en kits de diagnóstico de la misma. El diseño de estos sistemas mejoraría la relación costo/beneficio con respecto a los métodos convencionales permitiendo la obtención de un producto económicamente competitivo.
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