INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Influencia del catión inmovilizado y de la fuerza iónica sobre el fraccionamiento de pectinasas por cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados
Autor/es:
MARÍA V. GALLEGO; RUTH M. AUDAY; SILVIA A. CAMPERI; OSVALDO CASCONE
Lugar:
Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; XVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica; 1992
Resumen:
En la Reunión anterior de SAIB comunicamos la utilidad de la cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados para el fraccionamiento de preparados comerciales de pectinasas. El objetivo específico de este trabajo fue estudiar la influencia del catión inmovilizado y de la fuerza iónica del eluyente sobre la separación de la pectinesterasa de la mezcla de pectinasas (pectinesterasa [PE] + poligalacaturonasa [PG] + pectinliasa [PL]). Trabajando con columnas analíticas empacadas con Sepharosa Quelante, se ensayaron Cu2+, Fe3+, Ni2+ como cationes inmovilizados. La etapa de unión de los componentes de la muestra a la matriz cromatográfica se realizó en buffer Tris- acetato 50 mM pH 8,0 y la elusión en el mismo buffer a pHs variables entre 3,0 y 5,0. La fuerza iónica de ambos buffers fue regulada entre 0 y 1 M con NaCl. Se evaluó la estabilidad de la inmovilización de los cationes, no obteniéndose desprendimiento de Cu hasta pH 3,0, mientras que el Ni2+ y el Fe3+ solamente fueron estables a pH 4,5. En ausencia de NaCl tanto la PE como la PG y la PL eluyen con el lavado de la columna, para cualquiera de los tres cationes ensayados. En presencia de NaCl, se observa un binding de PE a la matriz cromatográfica que guarda relación con la [NaCl] hasta 500 mM, mientras la PL y la PG eluyen con el lavado de la columna. En una etapa posterior, la PE eluye por descenso en el pH del buffer de elusión. La pendiente de la curva de retención de PE en función  la fuerza iónica es similar para el Cu2+ y Ni2+, y significativamente superior  a la correspondiente al Fe3+. El conjunto de los resultados indica que no hay diferencias cualitativas en las características de binding y elusión con los 3 cationes ensayados, prefiriéndose el Fe3+ por tratarse de enzimas utilizadas para el procesamiento de alimentos, a pesar de la necesidad de trabajar a mayor fuerza iónica.
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