Purificación y Caracterización preliminar de ATP Sulfurilasa obtenida de Desulfovibrio desulfuricans

VANINA G. FRANCO; GUILLERMO I. BARRERA; ALBERTO RIZZI; CARLOS D. BRONDINO

Santa Fe

Workshop; 4to Workshop de Química Bioinorgánica, “Aspectos estructurales y funcionales de sistemas bioinorgánicos estudiados mediante métodos espectroscópicos, de cálculo, y sistemas modelo”; 2010

La reducción del sulfato juega un rol muy importante en ecosistemas anaerobios como agua de mar y entornos de agua pura. El sulfato es un compuesto estable no reactivo que debe ser activado para su reducción. En las bacterias reductoras de sulfato (SRB), la activación es llevada a cabo mediante la enzima ATP sulfurilasa (ATPS) transfiriendo y acoplando ATP al sulfato según la reacción                                                                           ATPS ATP + SO42-                 ->               APS + PPi   La proteína ATPS sulfurilasa obtenida de la SRB Desulfovibrio desulfuricans es un homotrímero (~141 kDa) y cada monómero posee un átomo de Co2+ o Zn2+ en su estructura. ATP Sulfurilasa ha sido poco estudiada. No se conoce la estructura cristalina de la enzima ni tampoco la función de los metales dentro de su estructura. Estudios de EXAFS proponen coordinación tetraédrica para el sitio metálico, coordinado a 3 átomos de azufre de cisteínas y a un átomo de nitrógeno imidazólico de histidina. Tampoco ha sido posible realizar una caracterización cinética completa de la enzima debido a la falta de un test cinético simple y confiable que permita evaluar la actividad de la enzima frente a diferentes sustratos e inhibidores. En este trabajo se presenta la purificación de la enzima a partir de cultivos de la bacteria Desulfovibrio desulfuricans y la determinación de sus propiedades moleculares y espectroscópicas. También se presentan estudios preliminares de un nuevo método cinétíco utilizando el pirofosfato producido como reactivo para una segunda reacción enzimática que produce fósforo inorgánico.