Optimación preparativa para secuenciar ADN bacteriano en Lactococcus lactis autóctonos

SIN CS; BRITOS MR, ORTEGA SM; VASEK, OLGA M.

Cordoba

Congreso; VII Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2018

Agencia Córdoba Ciencia

Las cepas de Lactococcus lactis subsp. lactis BiMIA-UNNE (35c) y Lactococcus lactis subsp. diacetylactis BiMIA-UNNE (166c), pertenecen a la Colección oficial de Microorganismos autóctonos de Corrientes de la Universidad Nacional del Nordeste incluida en el Sistema Nacional de Datos Biológicos. Estas cepas, aisladas del ambiente lácteo de la mencionada Provincia, revisten particular importancia dado que son parte constitutiva del fermento autóctono ?Gaucho? destinado a la elaboración de Queso Artesanal de Corrientes promulgado como Patrimonio Histórico, Social y Cultural de la Provincia en el año 2016.El objetivo de este trabajo fue optimizar la metodología para la extracción de ADN en cepas de Lactococcus lactis autóctonos con vistas a secuenciar su genoma y, posteriormente, ahondar en el estudio de los genes productores de bacteriocinas y los relacionados al metabolismo del citrato en la cepa 35c y en la cepa 166c, respectivamente.Para la extracción y purificación del ADN bacteriano, se utilizaron cuatro metodologías: Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) que emplea Bromuro de hexa-decil-trimetil-amonio como tampón de extracción (Stewart y Vía, 1993), Boiling Cells (CB) que utiliza ebullición celular (Araújo et al., 2004), Illustra blood genomicPrep Mini Spin Kit (GE Gealthcare, UK) e InnuPREP Bacteria DNA Kit (analytikjena Innuscreen GmbH, Alemania) A fin de determinar la mejor metodología: 1) se midió la absorbancia del ADN obtenido a 260 y 280nm (AmpliQuant 07, Hyland Scientific, Seattle-USA), 2) se calculó la concentración y pureza del ADN, y 3) se realizó una electroforesis en gel de agarosa del ADN con tinción mediante GelRed (Biotium Inc., Fremont-USA) contra distintas concentraciones de un marcador de peso molecular (Lambda/EcoR I-Hind III, Genbiotech, Argentina). De acuerdo con las metodologías empleadas, los mejores resultados se obtuvieron al utilizar el Kit InnuPREP Bacteria DNA (analytikjena Innuscreen GmbH, Alemania), con un Indice de pureza (IP)=1,8 y una concentración de ADN bacteriano (ADNb)=102ug/mL para la cepa 166c y un IP=1,5 y ADNb=98ug/mL para la cepa 35c. A diferencia de las restantes metodologías, que arrojaron valores de IP: 1,7-1,1/1,5-1,1 y ADNb menor a 50 ug/mL para las cepas 166c y 35c, respectivamente. Razón por la cual se empleará esta metodología en la instancia preparativa de estas dos cepas para secuenciar su genoma.