ARF6 promueve la exocitosis regulando la síntesis de lípidos, la salida de calcio de reservorios intracelulares y el ensamble de las SNAREs

LEONARDO PELLETÁN; SUHAIMAN LAILA; VAQUER CINTIA C; DE BLAS, GERARDO A; MAYORGA LS; BELMONTE, SILVIA A

Mendoza

Jornada; XXIII Jornadas de Investigación y V Jornadas de Posgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2013

UNCuyo

La cabeza del espermatozoide contiene una gran vesícula secretoria denominada acrosoma. La fusión de la membrana acrosomal externa con la membrana plasmática es una exocitosis regulada, calcio dependiente, denominada reacción acrosomal. La exocitosis acrosomal requiere diacilglicerol (DAG) que promueve un ciclo de retroalimentación positiva que lleva a la síntesis continua de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP2) luego de la activación de PKC y PLD1. El PIP2 incrementa la síntesis de IP3 que promueve la salida de calcio del acrosoma y la exocitosis. La síntesis de PIP2 implica la participación de la enzima fosfatidilinositol 4-fosfato 5-quinasa. La GTPasa ARF6 regula esta enzima y PLD1 en otros modelos de exocitosis. Nos preguntamos si en el espermatozoide humano esta intervenía regulando este ciclo.Mediante ensayos bioquímicos y funcionales determinamos que ARF6 se encuentra en la gameta masculina y que es requerida en la exocitosis inducida por calcio luego de la apertura de los canales de calcio activados por reservorio activando PLD1 y la quinasa. Mediciones de calcio intracelular en célula única y en tiempo real demostraron que ARF6 miristoilada y activa induce la salida de calcio del acrosoma y la exocitosis activando PLC y regulando la síntesis de IP3 y DAG. Este último no solo genera el ciclo de retroalimentación positiva sino que activa la cascada de proteínas de fusión