La salida de colesterol del plasmalema de espermatozoides humanos promueve la asociación de rab3a y la exocitosis acrosomal

BELMONTE SA, LOPEZ CI, ROGGERO CM, DE BLAS GA, TOMES CN, MAYORGA LS.

Mar del Plata

Congreso; I CONGRESO CONJUNTO DE SOCIEDADES BIOMÉDICAS; 2004

SAIC

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La reacción acrosomal (RA) implica la exocitosis del acrosoma regulada por calcio. Las gametas recién eyaculadas no pueden sufrir RA y necesitan un tiempo de capacitación en el tracto genital femenino o en un medio in vitro. La remoción de colesterol de las membranas es una modificación que sufre la gameta durante la capacitación, sin embargo no se conoce cómo esta pérdida afecta el proceso de fusión de membranas durante la RA. En este trabajo, permeabilizando espermatozoides con Estreptolisina O, logramos disociar los cambios que ocurren durante la capacitación de aquellos que suceden durante la exocitosis y demostramos que la salida de colesterol afecta directamente el proceso de fusión. Observamos que la incubación durante 15 min. de gametas capacitadas intactas y permeabilizadas con metil-b-ciclodextrina (CD) 1mM (extrae colesterol) aumenta significativamente el porcentaje de células reaccionadas. Contrariamente, CD precargada con colesterol inhibe la RA. Anfotericina B, un antibiótico poliénico que se une a esteroles, inhibe la RA en forma dosis dependiente y su efecto se revierte con colesterol, indicando que este es necesario en una concentración óptima para que ocurra la RA. Usando un quelante de calcio fotoinhibible, demostramos que la salida de colesterol es un proceso temprano en el camino exocítico. Experimentos funcionales comprobaron que la pérdida de colesterol no afecta la activación de Rab3A, evento temprano de la fusión, pero promueve su anclaje a las membranas. El análisis de las membranas por Western Blot demuestra que la depleción de colesterol incrementa la cantidad de Rab3A asociada a las mismas, resultado que se confirmó por inmunomicroscopía electrónica. Estos resultados nos permiten concluir que la salida de colesterol promueve el reclutamiento de Rab3A a la membrana plasmática de la gameta, localización fundamental para inducir el acercamiento de las membranas relevantes en la fusión.