INVESTIGADORES
ALVAREZ IGARZABAL Cecilia Ines
congresos y reuniones científicas
Título:
Síntesis de discos macroporosos conteniendo heparina. Aplicación como soportes en afinidad cromatográfica,
Autor/es:
RUBEN DARIO ARRUA; MARIANO DI MICOLI; CECILIA ALVAREZ IGARZABAL
Lugar:
Viña del Mar (Chile)
Reunión:
Simposio; IV Simposio Binacional de Polímeros Argentino-Chileno Archipol IV,; 2007
Institución organizadora:
Asociación Chilena de Polímeros
Resumen:
Este trabajo consiste en la síntesis y caracterización de tres sistemas de discos porosos, los cuales fueron derivatizados para unir covalentemente el ligando Heparina (Hep) y finalmente utilizar estos soportes en la purificación de antitrombina III (AT-III) por la técnica de afinidad  cromatográfica. En primer lugar se analizaron los efectos de los diferentes parámetros de reacción sobre la arquitectura porosa de diferentes barras poliméricas obtenidas a partir de los siguientes monómeros hidrofílicos de origen comercial: N – acriloil –tris (hidroximetil) aminometano (NAT) [CH2=CHCONHC(CH2OH)3], glicidil metacrilato (GMA) ó una combinación de ambos. Como agentes entrecruzantes se usaron: N,N metilen bis acrilamida (BIS) [(CH2=CHCONH-)2CH2] y trimetilolpropanotrimetacrilato (TRIM). De esta manera, por medio de reacciones de polimerización a radicales libres se obtuvieron tres sistemas de discos porosos: poli(NAT-BIS), poli(NATGMA- BIS) y poli(NAT-TRIM), los cuales presentaron en todos los casos porosidades superiores al 40% y curvas de distribución de tamaños de poros estrechas con máximos entre 50 y 800 nm. En un segundo paso, en base a los tamaños de poros y a los valores de superficie específica, se seleccionó el sistema poli(NAT-GMA-BIS) para llevar a cabo diferentes reacciones de derivatización sobre su superficie para unir el ligando Hep. De esta manera, la primera de las reacciones de derivatización es la generación de grupos aminos primarios. Para tal fin, los discos conteniendo grupos epóxidos (provenientes del GMA) en su superficie fueron puestos en contacto en medio básico (pH 8) con diaminas de diferentes largos: etilendiamina o hexametilendiamina. Estas reacciones de aminación se llevaron a cabo bajo diferentes condiciones (pH, tiempo de reacción, concentración de diamina, temperatura) alcanzando valores de 0,64 mmol NH2/g soporte seco. Posteriormente, a partir de los grupos amino presentes en la superficie se llevó a cabo la unión covalente del ligando Heparina a través de una reacción de aminación reductiva. De esta manera, los discos conteniendo grupos aminos terminales fueron puestos en contacto con una solución buffer pH 7 conteniendo Hep y NaBH3CN como agente reductor. Se realizaron reacciones de inmovilización del ligando bajo diferentes condiciones (tiempo, concentración de reactantes, etc.) obteniendosé valores tales como 1,4 mg Hep/g soporte seco. Finalmente, con los discos conteniendo Hep en sus estructuras, se están realizando ensayos de purificación de antitrombina III (AT- III) por la técnica de afinidad cromatográfica.