Rol del sistema de dos componentes YhcYZ  en la regulación por temperatura del gen desA de Bacillus cereus ATCC14579. 

PAULA CALACE; DE MENDOZA, D; MANSILLA, C; ALTABE, SILVIA (AUTOR CORRESPONDIENTE)

Rosario

Congreso; Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM) Asociación Argentina de Microbiología (AAM); 2016

Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM) Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

U‐1199 Rol del sistema de dos componentes YhcYZ  en la regulación por temperatura del gen desA de Bacillus cereus ATCC14579. P Calace, MC Mansilla, D de Mendoza, SG Altabe Instituto de Biología Molecular y Celular Rosario. IBR‐Conicet‐ Fac. de Cs. Bioquímicas. y Farmacéuticas. UNR. Rosario, Santa Fé, Argentina.  Bacillus  cereus   es   un  patógeno  oportunista  transmitido  por  los  alimentos,  capaz  de  producir  gastroenteritis  y  otras  infecciones  severas  en humanos. Estas  bacterias  pueden  vivir en  hábitats muy  variados  y adaptarse a  crecer en  una  gama muy amplia  de   temperaturas. B.  cereusATCC14579 se adapta a bajas  temperaturas de crecimiento ajustando la fluidez de su membrana plasmática principalmente por incorporación de  ácidos  grasos  insaturados  (AGI).  A  37°C  contiene  una  alta  proporción  de  Δ10‐AGI  en  sus  lípidos  de  membrana,  mientras  que  a  bajas temperaturas sintetiza Δ10‐ y Δ5‐AGI. Estos AGI son sintetizados por las desaturasas DesA y DesB que introducen dobles enlaces en las cadenas de los ácidos grasos  (AGs) de los fosfolípidos de membrana en las posiciones 5 y 10 respectivamente. En nuestro laboratorio demostramos que la expresión del gen desA se induce a bajas  temperaturas de crecimiento mientras que la expresión de desB es constitutiva.  Recientemente en  B. cereus ATCC 14579 ha sido propuesto que el sistema de dos componentes YhcYZ  (CasKR)  juega un papel clave en la adaptación al  frío regulando  la  síntesis  de   AGs,   en  particular  la  expresión  de   los  genes  desA  y  desB,  sin  embargo  hasta  el  momento  no  hay  resultados concluyentes sobre el mecanismo de  dicha regulación. Dado que las proteínas YhcYZ están presentes en Bacillus subtilis, con altos porcentajes de identidad con respecto a las de B. cereus,   el objetivo de este trabajo es evaluar en B. subtilis la participación de las mismas en la expresión del gen desA de B. cereus. Para ello se construyó una cepa de B. subtilis mutante en el operón yhcYZ por reemplazo génico, utilizando un casete de resistencia a espectinomicina (Sp). Esta cepa mutante yhcYZ ‐ y la cepa de B. subtilis salvaje fueron transformadas con una construcción que contiene la zona promotora del gen desA fusionadas al gen lacZ de Escherichia coli y con ellas se procedió a estudiar la influencia del sistema de dos componentes YhcYZ sobre la expresión del promotor pdesA. Para ello se realizaron ensayos  en placa y en medio líquido de la actividad β‐galactosidasa  a  37°C,  25°C,  15°C  y  10°C.  Los  resultados  mostraron  que  cuando  la  cepas  fueron  cultivadas  a  37°C  los  niveles  de  actividad  β‐galactosidasa fueron relativamente bajos, pero la actividad β‐galactosidasa aumentó notablemente tanto en la cepa salvaje como en la mutante en el sistema YhcYZ a temperaturas bajas de crecimiento. Este resultado estaría indicando que la expresión del gen desA que codifica para la Δ5 desaturasa de B. cereus es activada por la temperatura de crecimiento y es independiente del sistema YhcYZ y que además existirían en Bacillus otros elementos regulatorios que deben ser investigados. La comprensión de los mecanismos de adaptación de B. cereus  para crecer a distintas temperaturas podría contribuir a controlar la multiplicación en los alimentos refrigerados y prevenir brotes de intoxicación por alimentos.