Análisis de la estructura de la prolactina ovina por digestión proteolítica parcial.

FERNÁNDEZ, M.L.; CURTO M.; WOLFENSTEIN-TODEL, C

Mendoza

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; 1998

La prolactina ovina (oPRL) forma parte de una familia de hormonas que incluye a las hormonas de crecimiento, prolactina y lactógenos placentarios. Las únicas que han sido cristalizadas son las hormonas de crecimiento humana (hGH) y porcina. Con el objeto de comparar la estructura tridimensional de la oPRL con la de la descripta para la hGH se sometió a la oPRL nativa a la digestión proteolítica parcial con la proteasa V8, específica para enlaces que involucran residuos de ácido glutámico. Los fragmentos obtenidos se identificaron por electroforesis en geles de poliacridamida en presencia de SDS seguida de electrotransferencia en membranas de membranas de PVDF, y su secuenciación en un secuenciador automático de aminoácidos (LANAIS-PRO). Se observó en primer lugar la aparición de una banda de aproximadamente 13.5 kDa, correspondiente a una ruptura en la zona de los residuos 118-122, rica en ácido glutámico, junto con las respectivas bandas de 8 y 9 kDa. La siguiente banda formada fue de 16 kDa, originada  por el corte en el residuo 143, con la simultánea aparición de una banda de 7 kDa. El análisis de los fragmentos de 7 y 8 kDa indica una ruptura importante en el residuo 67. Finalmente, en una menor proporción, se formaron dos fragmentos de 11 kDa cada, correspondientes a la ruptura en el residuo 101. La comparación de estos resultados con la información existente respecto de la hGH, indican que el sitio de clivaje preferencial de ésta, el Glu 31, presente también en la oPRL donde es poco atacado, sugiriendo la existencia de diferencias en el plegamiento de esta región de la molécula en ambas hormonas