Determinación de isoformas de eritropoyetina recombinante humana por electroforesis capilar: Estudio retrospectivo de resultados de laboratorio y optimización del método de análisis

TKACHENKO, M; COLLAZO, D; VIZIOLI, NM

Corrientes

Congreso; XI Congreso Argentino de Química Analítica; 2021

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La eritropoyetina (EPO) es una hormona natural que estimula la producción y liberación de glóbulos rojos a partir de la médula ósea. La EPO fue una de las primeras glicoproteínas recombinantes terapéuticas, comercializada para el tratamiento de la anemia. Posee patrones de glicosilación complejos sobre N- y O-, presentando numerosas isoformas que juegan un rol clave en la biodisponibilidad, actividad, potencia y estabilidad de la EPO. Su caracterización es extremadamente importante para asegurar la comparabilidad y la eficacia de la preparación.A partir de un estudio colaborativo iniciado por la Dirección Europea para la Calidad de los Medicamentos y la Atención Sanitaria (EDQM) en 1.999 se estableció a la electroforesis capilar zonal como el método de elección para la cuantificación de las isoformas de EPO1. A pesar del tiempo transcurrido en la utilización del método descripto en la Farmacopea Europea y de los intentos de optimización del método2, se verifica que las columnas pierden eficiencia rápidamente.Por otra parte, el tiempo de acondicionamiento y de análisis son muy prolongados, requiriendo a menudo la repetición de las corridas para lograr la precisión necesaria para el ensayo, con la consiguiente pérdida de recursos materiales y no materiales.En este trabajo se presenta el relevamiento y análisis de los resultados obtenidos a lo largo de 10 años de determinación de las isoformas de la EPO por electroforesis capilar, a fin de identificar los factores que más afectaron el comportamiento y la eficiencia del sistema analítico y proponer modificaciones para mejorar el rendimiento de las columnas, el tiempo de análisis, la resolución de los picos y la precisión del método.El desvío estándar relativo del tiempo de migración de las isoformas 2 y 6 resultó entre 0,71 y 2,0%, mientras que la precisión inter-ensayos fue de 1,5 y 1,6%, para la isoforma 2 y para la 6, respectivamente. La resolución entre los picos de las isoformas 5 y 6 osciló entre 1,0 y 1,8, notándose en general una tendencia decreciente intra-ensayo a partir de la octava corrida. Basándose en el desvío estándar relativo del tiempo de migración y la observación de la línea de base, y considerando corridas con idénticos parámetros electroforéticos se pudo establecer que el lavado inicial de la columna capilar previo a cada ensayo es crítico.Otros aspectos como el número acumulado de corridas en la columna, la temperatura de disolución de los componentes del electrolito, el tiempo de uso de los electrodos de platino, la procedencia de los componentes principales del electrolito, no demostraron ser factores determinantes.1.Bristow, A., & Charton, E. (1999). Pharmeuropa, 11 (2), 290-300. / 2.Zhang, J., Chakraborty, U., Villalobos, A., Brown, J., Foley, J. (2009).Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 50, 538-543. *Agradecimientos: Financiamientode la Universidad de Buenos Aires, Proyecto 20020190100360BA.