Actividades proteolíticas halofílicas en la

STUDDERT C.A., DE CASTRO R.E. Y SÁNCHEZ J.J.

Carlos Paz, Córdoba

Congreso; XXIX Reunión Anual de SAIB; 1993

  La arqueobacteria haloalcalófila N. occultus vive en ambientes de elevada salinidad (3.5 M NaCl) y pH (10). Su medio intracelular es también altamente salino (3.5 M KCl), lo cual determina propiedades particulares de sus enzimas. Hasta el presente, se conoce poco sobre la enzimología de estas bacterias. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar las actividades proteolíticas de este organismo. Los métodos utilizados fueron: medición de actividad proteolítica, métodos cromatográficos resistentes a altas concentraciones salinas e immunoblotting. Se identificaron hasta el momento al menos dos actividades azocaseinolíticas, una intra y otra extracelular.  La actividad intracellular fue retenida en DEAE-celulosa en presencia de (NH4)2SO4, y en hidroxiapatita. Su actividad y estabilidad son dependientes de la concentración de KCl (óptimo: 3M). Resultados preliminaries en Western blot realizados con extractos de N. occultus y N. pharaonis y un anticuerpo heterólogo contra proteasoma de una arqueobacteria termoacidófila, sugieren la presencia de una anda inmunorreactiva que correspondería a una de las subunidades de dicha protease. La actividad extracelular detectada en el medio de cultivo se separó en tres picos de actividad en una columna de hidroxiapatita. La caracterización preliminary de cada uno de los picos produjo idénticos resultados: temperatura optima de 60 ºC, inhibición por DFP y no por E-64, igual volumen de elución en columna de filtración en gel. Esto sugiere que podría tratarse de distintas formas de la misma enzima. Conclusiones: se identificaron y caracterizaron parcialmente dos actividades azocaseinolíticas, una extracelular y una intracelular. Resultados preliminaries sugieren la presencia de la proteasa multicatalítica en estos organismos.