Síntesis de un dipéptido en un medio bifásico acuoso - orgánico catalizada por granulosaína, de Solanum granuloso-leprosum (Solanaceae)

CANTERA, A.; VALLES, D.; ADARO M.; BARBERIS, S.

San Luis

Simposio; III Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones VIII Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformacions; 2018

Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones

Los procesos catalíticos en sistemas acuoso-orgánicos aplicando proteasas, tales como la síntesis de péptidos bioactivos, presentan características notables como la preparación simple, condiciones de reacción suaves y fácil separación de los productos1. El objetivo de este trabajo fue utilizar el extracto proteolítico pre-purificado de granulosaína (Solanum granuloso-leprosum) como catalizador de la síntesis del dipéptido N-α-CBZ-Tyr-Val-OH (Z-YV) en un medio bifásico acuoso-orgánico.La selección del medio de reacción se realizó en base a estudios de estabilidad de la enzima en sistemas acuosos-orgánicos, siendo 50 % (v/v) de acetato de etilo y buffer Tris-HCl (0,1 M) pH 8 el más promisorio para la síntesis peptídica. La selección del donante de acilo (N-α-CBZ-Tyr-p-nitrofenil éster, 14 mM) y del nucleófilo (L-Val-OH, 6,158 mM) se basó en los parámetros cinéticos y en las preferencias de granulosaína frente a sustratos aminoacídicos sintéticos, en el medio de reacción seleccionado. Se utilizó granulosaína libre (200µL; 2,47mg/ml), 2-mercaptoetanol (20 mM) como activador, trietilamina (6,158 mM) como base aceptora de protones, 40°C y 200 rpm. Granulosaína catalizó la síntesis de N-α-CBZ-Tyr-Val-OH en acetato de etilo 50% (v/v) y buffer Tris-HCl 0,1M (pH 8), a 40ºC y 200 rpm. No obstante, el rendimiento en producto (11,86 %) debe ser optimizado en base a la disminución de la concentración del producto de hidrólisis (N-α-CBZ-Tyr-OH), ya sea aumentando la concentración del nucleófilo hasta el límite de solubilidad o disminuyendo el contenido de agua en el medio de reacción.