Inmovilización de Asclepias curassavica L. en octil glioxil sílica (OGS). Aplicación en la síntesis de un péptido bioactivo.

SONIA BARBERIS.; CONSTANZA LIGGIERI.; ANABELLA ORIGONE.; FANNY GUZMÁN.; CLAUDIA BERNAL. ; ANDRÉS ILLANES.; RONNY MARTÍNEZ.

San Luis

Simposio; III Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones (SILaByB). San Luis; 2018

Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones

La síntesis de péptidos catalizada por proteasas es una alternativa a la síntesis química (Barberis y col., 2018). El uso de solventes orgánicos, altas temperaturas y pH afectan la actividad y la estabilidad enzimática. El objetivo de este trabajo fue inmovilizar asclepaína, una proteasa de Asclepias curassavica L, en sílica (S) sin funcionalizar, glioxil sílica (GS), y octil-glioxil sílica (OGS); para obtener catalizadores robustos para la síntesis de péptidos bioactivos. Asclepaína-OGS mostró un rendimiento de actividad (Ya) de 178%, mientras Asclepaína-S y Asclepaína-GS presentaron Ya de 64% y 16%, respectivamente. La adsorción hidrofóbica de asclepaína (grupos octil) mejoró su orientación mientras la unión covalente (grupos glioxil) le confirió estabilidad (Bernal y col., 2018). Los sustratos empleados para la reacción de síntesis fueron N-α-Benciloxicarbonil-valina-p-nitrofeniléster (Z-VpNO) y Gly, donador de acilo y nucleófilo respectivamente. La reacción se llevó en metanol (30% (v/v)) y buffer Tris-HCl (0,1M) pH 8, a 40ºC y 200 rpm. Se tomaron periódicamente muestras y se analizaron por RP-HPLC, durante 24 h. Después de 3 h de reacción, se obtuvo un producto de síntesis (tR: 3,7 min), el cual se purificó en una columna C18, y su estructura se dilucidó por espectrometría de masas. El ion molecular (m/z: 310) correspondió al dipéptido N-α-benciloxicarbonil-Val-Gly-OH (Z-VG). El máximo rendimiento en producto obtenido en la reacción de síntesis enzimática fue 95%. Este valor fue 76% mayor al obtenido utilizando la enzima solubilizada en el medio de reacción. Asclepaína-OGS demostró ser un catalizador robusto con características compatibles con los medios y condiciones de reacción utilizados para la síntesis enzimática de péptidos bioactivos.