Comportamiento de granulosaina, extracto proteolítico de Solanum granuloso-leprosum (solanaceae), en sistemas acuosos-orgánicos

BARBERIS SONIA; VALLES DIEGO; ADARO MAURICIO; CANTERA ANA

VALPARAISO

Jornada; JBIOCAT 2017; 2017

Pontificia Universidad Católica de Valparaiso - Escuela de Ingeniería Bioquimica

La mayoría de los procesos catalíticos enzimáticos son llevados a cabo en medio acuosos. Sinembargo, numerosas investigaciones han demostrado que las enzimas pueden ser activas enmedios no convencionales, tales como los solventes orgánicos[1].El objetivo de este trabajo fue estudiar el comportamiento del extracto proteolítico pre-purificadode granulosaína (Solanum granuloso-leprosum) en diferentes medios acuosos-orgánicos,mediante un estudio comparativo de la estabilidad operacional y la estructura secundaria para suposterior aplicación a procesos catalíticos en sistemas acuoso-orgánicos.La estabilidad operacional del extracto enzimático pre-purificado fue evaluada en sistemasmiscibles y bifásicos (líquido-líquido) formados por un solvente orgánico (30%, 50% y 70% (v/v))y buffer Tris-HCl (0,1M) pH 8, y 40 ºC. Los solventes orgánicos se seleccionaron a partir de undiseño de componentes principales que los agrupa según descriptores físico-químicos [2]. Laestabilidad se expresó como actividad proteolítica residual (UI/mg) luego de 24 h y tiempo de vidamedia (t½). El efecto de los solventes orgánicos sobre la estructura secundaria de granulosaína fueestudiado por FTIR. Los espectros de granulosaína en los distintos medios y en buffer se midierona 25 ºC, en un equipo Nicolet Protege (modelo 460) con transformada de Fourier, provisto de undivisor de haz de CsI en el rango de 225 a 4000 cm-1, con una resolución espectral > 2 cm-2 entre2000 y 4000 cm-1. Los resultados comparativos se expresaron como coeficiente de similitudespectral (r) [3]. La estabilidad operacional de granulosaína disminuyó en la mayoría de losmedios acuosos-orgánicos estudiados respecto de buffer solo. No obstante, en etilenglicol (30%(v/v) y diclorometano (50% (v/v)), granulosaína expresó actividades residuales similares a lasobtenidas en buffer (18,5 UI/mg). En tanto, el t½ en dichos medios fue de 13,7 y 16, 8 hrespectivamente. Estos resultados se reflejaron en los espectros de granulosaína obtenidos por FTIR,donde no se observaron cambios conformacionales significativos de la enzima en dichosmedios. Los coeficientes de similitud espectral (r) fueron 0,82 y 0,88 para etilenglicol (30% (v/v)y diclorometano (50% (v/v)). Este trabajo contribuye a la selección de los medios más promisoriospara las reacciones de síntesis, utilizando granulosaína, y aporta una manera sencilla y rápida deanalizar cuantitativamente los cambios de estructura secundaria de un biocatalizador, siendo unaporte original a los protocolos de síntesis enzimática en medios orgánicos.