ACTIVIDAD ENDOSTEROLITICA EN ESTRACTO PROTEOLITICO DE NEP (Natrialba magadii extracellular proteasa)

ADARO, M. AND BARBERIS, S.; DE CASTRO, R.

San Luis

Congreso; XXXII Congreso de la Sociedad de Biología de CuyoI; 2014

Sociedad de Biología de Cuyo

Natrialba magadii extracelular (anteriormente Natronobacterium) pertenece al grupo halo alcalofilos, predominan en ambientes hipersalinos (baja actividad de agua). La actividad esterolítica de Natrialba magadii se determinó por el método de Silverstein´s (1974), modificado de acuerdo a las condiciones óptimas de la enzima. La actividad se estudió usando ésteres de N--carbobenzoxi-p-nitrofenil de algunos aminoácidos como sustrato. Los ensayos se realizaron a 40 ° C en 0,1 M de tampón Tris-HCl (pH 8) que contiene cys 20 mM, NaCl 1,5 M y 0,15, 0,3, y 6,25 mM de cada sustrato en la mezcla de reacción. P-nitrofenol fue seguido a 405 nm en un Cintra espectrofotómetro UV-Visible 6. Una unidad de actividad de la enzima arbitraria (Ucbz) se definió como la cantidad de proteasa que libera una mol de p-nitrofenolato por minuto en las condiciones del ensayo. Para determinar la mol de p-nitrofenol producido durante la reacción, se llevó a cabo una curva estándar con p-nitrofenol (5-50 mol) en tampón 0,1 M Tris-HCl (pH 8) que contiene 5% de acetonitrilo. Natrialba magadii fue probado contra varios ésteres de N--carbobenzoxi-p-nitrofenil diferentes de los L-aminoácidos. El sustrato preferido de Natrialba magadii era el derivado y orden decreciente dosis de Asn Gln, Gly, Lys, Tpr. Estos resultados demostraron la alta selectividad de Natrialba magadii por aminoácidos polares.