Determinación de la actividad antimicrobiana del extracto enzimático de polen de Acacia caven (Mol) Molina, por el método cinético turbidimétrico

GUSTAVO QUIROGA, JUAN MANUEL TALIA, CRISTINA BARCIA Y SONIA BARBERIS

La Plata

Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotranformaciones; 2012

Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones (SAByB)

El hecho de que los antibióticos naturales no generan resistencia por parte de las bacterias, es suficiente para plantear el empleo regular de los mismos y es por ello que, en los últimos años, las investigaciones se han focalizado en indagar sobre la potencial aplicación de nuevos compuestos presentes en la naturaleza.1,2 El objetivo de este trabajo fue evaluar la acción antimicrobiana del extracto enzimático del polen de Acacia caven (Mol.). Se utilizó un método cinético-turbidimétrico. De las correspondientes curvas de crecimiento del microorganismo, se evaluaron las velocidades específicas de crecimiento del germen en ausencia (testigo) y en presencia de diferentes concentraciones enzimáticas. Se procedió preparación del extracto enzimático del polen de Acacia caven (Mol.), el cual fue centrifugado durante 10 min a 4º C y 12.000 rpm. El sobrenadante fue utilizado para la preparación de las diluciones del extracto. Se colocaron 100 mL de caldo Müller-Hinton en cada Erlenmeyer de 250 mL, envasando además 30 mL de caldo en Erlenmeyers de 125 mL (para la preparación de  inóculos).  Una vez acondicionados los medios de cultivo, se procedió a la esterilización en autoclave automático Barnstead Modelo C 57835. Para determinar cuantitativamente la sensibilidad de S. aureus ATCC 25 923 como modelo de microorganismo Gram positivo y Escherichia coli ATCC 25 922 como modelo de microorganismo Gram negativo, frente al extracto enzimático de polen a Acacia caven (Mol.) se empleó un método cinético-turbidimétrico.3 El contenido de un cultivo en agar inclinado de 24 h (E. coli o S. aureus), fue transferido a un frasco Erlenmeyer conteniendo 30 mL de caldo Müeller Hinton e incubado a 35º C durante 18 h, con agitación permanente. Las experiencias cinéticas de crecimiento microbiano se realizaron en frascos Erlenmeyers conteniendo 100 mL de caldo Müeller Hinton adicionados de concentraciones crecientes del extracto, incorporando 2 mL del inóculo previamente preparado, dejando uno sin extracto como control. Posteriormente, se incubaron en una cámara de cultivo Rosi 1000 (35 ºC, 180 rpm), se extrajeron alícuotas a intervalos de 20 min durante 5 h y se leyeron las  transmitancias a 720 nm, utilizando como blanco caldo Müeller – Hinton.                                                   ln Nt = 27,1 - 8,56 . T            (E. coli)                               (1)                                                   ln Nt = 27,4 - 10,3 . T        (S. aureus)                               (2) donde Nt: unidades formadoras de colonias (UFC)/mL y T: transmitancia a 720 nm, se calcularon los valores de ln Nt para obtener las curvas de crecimiento, en ausencia y en presencia de distintas concentraciones del extracto enzimático de Acacia caven. Los resultados de este estudio indican que el extracto enzimático de polen de Acacia caven mostro una considerable acción antimicrobiana frente al microorganismo Gram positivo S. aureus , sin embargo el extracto no mostro efecto antimicrobiano frente a E. col, sino que se observo un aumento de las pendientes de las curvas de crecimiento al compararlas con el testigo. Con este trabajo contribuyo a evaluar la eficacia de la acción antimicrobiana del extracto enzimático de Acacia caven sobre microorganismos de interés clínico como S. aureus ATCC 25 923, el cual mostro gran sensibilidad, no así cuando se ensayo frente a E. coli ATCC 25 922, en donde  no se observo inhibición de crecimiento, sino que favoreció el mismo. 1 Onlen Y, Duran N, Atik E, Savas L, Altug E, Yakan S, Aslantas O. Antibacterial activity of propolis against MRSA and synergism with topical mupirocin. The Journal of Alternative and Complementary Medicine, 13(7): 713-718, 2007. 2 Talia JM, Alvarez MA, Debattista NB, Pappano NB, Susceptibility of staphylococcus aureus strains against toward combinations of oxacillin-2,4-dihydroxychalcone, Folia Microbiol. 54(6): 516-520, 2009. 3 Pappano NB, Centorbi OP, Debattista NB, Milán CC, Borkowski EJ y Ferretti FH, Cinética de la acción bacteriostática de chalconas naturales y de síntesis sobre una cepa de Staphylococcus aureus, Rev. Argent. Microbiol. 17(1): 27-32, 1985.