INQUISAL   20936
INSTITUTO DE QUIMICA DE SAN LUIS "DR. ROBERTO ANTONIO OLSINA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Lipoproteínas humanas tratadas con diferentes monosacáridos para su separación en chips de vidrio usando fluorescencia inducida por laser.
Autor/es:
MESSINA GERMÁN A.; WITOS JOANNA; SEIA MARCO A.; STEGE PATRICIA W.; RABA JULIO; RIKKOLA MARJA-LIISA.
Reunión:
Congreso; VI Congreso Argentino de Química Analítica; 2011
Resumen:
Lipoproteínas humanas tratadas con diferentes
monosacáridos para su separación en chips de vidrio usando fluorescencia
inducida por laser.
Germán A. Messina*,
Joanna Witos**, Marco A. Seia*, Patricia W. Stege*,
Julio Raba*, Marja-Liisa Riekkola**
*INQUISAL,
Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia,
Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis,
Argentina. E-mail: messina@unsl.edu.ar.
**Laboratorio
de Química Analítica, Departamento de Química, P. O. Box 55, FIN-00014
Universidad de Helsinki, Finlandia.
Las
lipoproteínas (LP) son complejos macromoleculares compuestos por proteínas y
lípidos que transportan las grasas por el torrente sanguíneo hacia todo el
organismo. Son esféricas, hidrosolubles y están formadas por un núcleo de lípidos apolares (colesterol esterificado y triglicéridos) cubiertos
con una capa externa polar de 2 nm que
contiene apoproteínas, fosfolípidos y colesterol
libre. Las LP mas importantes en el transporte de colesterol son las LP de baja densidad (LDL), las cuales
transportan el colesterol desde el hígado al resto del cuerpo, por lo tanto un nivel alto de LDL
se asocia con la aterosclerosis, infarto de miocardio y apoplejía, y las LP de alta densidad (HDL) que
transportan el colesterol desde los tejidos al hígado para su excreción.
En este estudio diferentes monosacáridos como glucosa, fructosa y
sorbitol fueron utilizados para realizar una ultracentrifugación diferencial de
las LP presentes en suero humano [1]. Luego, las LP aisladas fueron marcadas
fluorescentemente y separadas utilizando electroforesis capilar on-chip. Para el marcaje fluorescente de las LP se utilizo
un esfingolípido (marcador lipofílico), NBD C6-ceramide (6-((N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)hexanoil)esfingosina).
el cual es rápidamente incorporado en la superficie
de las LP.
Los azucares utilizados durante el aislamiento por ultracentrifugación
previnieron la fuerte y desfavorable adsorción de LP sobre la pared de los
microcanales, permitiendo una separación selectiva utilizando chips de vidrio.
El canal de separación del mismo fue de 70 mm de largo y 50 µm de diámetro interno. El buffer de
corrida utilizado fue solución tampón de fosfato 5 mM y 0.04 mM de sodio
dodecilsulfato at pH 7.4. Las LP marcadas fluorescentemente fueron detectadas
utilizando fluorescencia inducida por laser y los
resultados obtenidos mediante el método propuesto fueron comparados con los
obtenidos mediante electroforesis capilar de zona (CZE) mostrando alta
resolución, mejor separación y una elevada sensibilidad. Asimismo, se obtuvo
una elevada repetitividad y reproducibilidad inter e intra análisis, lo que se
repitió cuando se utilizaron diferentes chips de vidrio.
El
método propuesto fue satisfactoriamente aplicado en la determinación de
diferentes tipos y subtipos de LP en suero de pacientes con aterosclerosis, demostrando su potencial
aplicación como método de rutina para la detección de LP.
REFERENCIAS
[1] Joanna Witos, Geraldine Cilpa, Gebrenegus Yohannes, Katariina Oorni,
Petri T. Kovanen, Matti Jauhiainen, Marja-Liisa Riekkola. Sugar treatment of human lipoprotein
particles and their separation by capillary electrophoresis. J. Sep. Sci. 33
(2010) 25282535