ENTEROTOXEMIA POR Clostridium perfringens TIPO «E» EN BOVINOS ADULTOS

REDONDO L.; FARBER M.; VENZANO A.; PARMA Y.R.; MORRIS W.E.; FERNÁNDEZ MIYAKAWA M.E.

Conferencia; XIX Reunion Cientifico Tecnica AAVLD; 2012

Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico

Introducción:Clostridium perfringens es un importante patógeno intestinal, que se encuentra en diversos ambientes, incluyendo el sistema digestivo de humanos y animales, donde forma parte de la microbiota normal. Los aislamientos de esta bacteria se agrupan en 5 toxinotipos (A, B, C, D y E) de acuerdo a la producción de 4 toxinas (alfa, beta, iota y épsilon). Los cuadros de enterotoxemia tipo E, se caracterizan por enteritis hemorrágica y muerte súbita en conejos, corderos y terneros; aunque en la actualidad existen pocos reportes de esta enfermedad se propone que la ocurrencia seria mayor a la propuesta. Este toxinotipo, se define por la producción de toxinas iota y alfa, aunque en la actualidad no se comprende completamente el rol de las mencionadas toxinas y los mecanismos implicados en la patogenia. A esto último debemos sumar la producción de otras enzimas que podrían actuar como potenciales factores de virulencia (toxina lambda y ureasa). En el presente reporte se describe un brote de enterotoxemia en bovinos adultos, ocasionado por C.perfringens tipo E, junto con la caracterización genética de los aislamientos obtenidos.Materiales y métodos:Anamnesis: el brote ocurrió a fines del invierno en un rodeo de cría de la provincia de Buenos Aires, aproximadamente un mes después de la parición. El lote comprende 300 vacas de entre 3 y 5 años, divididas en 3 grupos de 100 animales, al momento del brote, los animales se encontraban sobre una pastura a base de agropiro. En uno de los grupos se produjo, en el transcurso de una semana, la muerte de 10 animales, ninguno de los cuales presento signos previos. No se observó este cuadro en ninguna otra categoría.Necropsia e histopatología: Inmediatamente después de la muerte de uno de los animales afectados, se realizó la necropsia, y se registraron las lesiones observadas. Se procedió a tomar muestras de hígado, bazo, riñón y diferentes porciones del intestino, que fueron conservadas para histopatología y bacteriología. Para lo primero se utilizaron protocolos de rutina, realizando tinciones de hematoxilina-eosina.Bacteriología: las muestras fueron sembradas en forma directa en placas de agar McConkey y Salmonella-Shigella. Paralelamente, se realizó un enriquecimiento en caldo tetrationato y BHI, los mismos fueron incubados a 37°C durante 18-24hrs. Para el diagnostico de anaerobios se utilizaron placas de agar sangre con sangre ovina desfibrinada al 5%, y se realizó enriquecimiento en caldo carne picada, estos medios fueron incubados en jarra de anaerobiosis a 37°C durante 18-24hrs.Caracterización genotípica: Para determinar el toxinotipo de los aislamientos compatibles con C.perfringens se amplificaron mediante una PCR multiplex los genes de 6 toxinas (cpa, cpe, cpb, cpb2, etx, iA). En forma complementaria se realizó la tipificación mediante MLST (multilocus sequence typing), analizando la secuencia de 8 genes (ddlA, dut, glpK, gmK, plc, recA, sod y tpi) previamente amplificados mediante PCR.Resultados:Lesiones: el principal hallazgo observado a la necropsia fue necrosis hemorrágica, extensa y difusa en abomaso e intestino delgado. El análisis histopatológico reveló yeyunitis e ileitis necrótica difusa, con abundante detrito celular en la luz del intestino y escaso infiltrado inflamatorio. Se observó también bacilos gram positivos compatibles con Clostridium adheridos a los restos celulares. También se observó infiltrados inflamatorios en colon y linfonodulos mesentéricos.Bacteriología: No se observó crecimiento en los cultivos aerobio y anaerobio de riñón, hígado y bazo. A diferencia del cultivo anaerobio de intestino, donde se obtuvo gran crecimiento de colonias compatibles con C.perfringens, las cuales se caracterizaron mediante pruebas bioquímicas de rutina, varias de estas colonias fueron conservadas en caldo de carne picada.Caracterización genotípica: mediante PCR multiplex se demostró que los aislamientos obtenidos pertenecían al tipo E y poseían el genotipo cpa+, iA+, cpe+, cpb2+. En el análisis de MLST se comparó las secuencias obtenidas a partir de los aislamientos antes mencionados junto con las disponibles de aislamientos tipo E provenientes de bovinos de Norteamérica, se determinó que los mismos se encontraban estrechamente relacionados.Discusión:El presente estudio reporta el primer caso de enterotoxemia por C. perfringens tipo E en un bovino adulto en nuestro país. Este agente infeccioso es considerado como una causa poco común de enfermedad, sin embargo en los últimos años se ha observado un mayor número de reportes de diversos orígenes geográficos. Como complemento a la clasificación en toxinotipos mediante PCR, se utilizó una nueva técnica la cual permitiría identificar grupos de cepas potencialmente patógenas, aun dentro de la clasificación utilizada tradicionalmente. Debido a la extensa distribución de este agente es importante que el diagnostico bacteriológico sea acompañado de una correcta tipificación que permita la identificación de los toxinotipos responsables de cuadros como el reportado en este trabajo, para esto es de suma importancia desarrollar nuevos sistemas de diagnóstico que permitan identificar grupos de cepas con mayor capacidad patógena para los animales domésticos, como en el caso de C.perfringens tipo E, para lo cual será necesario contar con un mayor número de reportes que permitan comprender la epidemiología de los cuadros asociados, e identificar marcadores de patogenicidad en C.perfringens.