Detección de variantes de toxina Shiga mediante un ELISA de captura con anticuerpos de pollo

PARMA Y.R.; CHACANA P.A.; ROGE A.; KRUGER P.; LUCCHESSI P.M.; FERNANDEZ MIYAKAWA ME

Congreso; I Congreso Internacional de Zoonosis y Enfermedades Emergentes. VII Congreso Argentino de Zoonosis; 2011

La Argentina es el país con mayor incidencia de Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) a nivel mundial, con 500 casos anuales en niños menores de 5 años (1). La principal causa de la enfermedad se debe a la infección con Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC), productora de toxina Shiga. La toxina Shiga tipo 2 (Stx2) esta asociada a una mayor severidad en la enfermedad que Stx1 y de ésta las variantes EDL,vha y vhb son las que presentan mayor citotoxicidad en Vero (2). El objetivo de este trabajo fue desarrollar un ELISA de captura para detectar en sobrenadantes de bacterias la presencia de Stx2. Se obtuvieron anticuerpos que reconocieron a la holotoxina mediante inmunización de pollos y conejos con la subunidad B recombinante de Stx2. Se emplearon los anticuerpos de pollo (IgY) purificados a partir de la yema de huevo, como anticuerpos de captura y los IgG de conejo, conjugados con peroxidasa como anticuerpos de detección. Se ensayaron 11 sobrenadantes de bacterias inducidos con mitomicina C (0,5 ug/ml) con las variantes: EDL (n:4), vha (n:2), vhb (n:2), g (n:1) y como control negativo, sobrenadante de 2 cepas de E.coli no productoras de toxina. El cut off se calculó como 2 veces la DO a 450 nm de los controles negativos. Las muestras fueron testeadas por duplicado. Todos los sobrenadantes ensayados fueron positivos, excepto el correspondiente a una de las cepas con variante vhb. El rendimiento de IgY total fue de 8,4 mg por huevo, y considerando que utilizamos 135 ug de IgY total por placa de ELISA, esto representaría una gran cantidad de anticuerpo disponible a un bajo costo. En conclusión, los anticuerpos anti-Stx2B de pollo y conejo reconocieron diferentes variantes de Stx2 en un ELISA de captura. Se plantea de esta forma, una alternativa económica y efectiva para ser utilizada en el futuro para el diagnóstico rápido del SUH.