"Effect of stress starvation on the proteolytic activities of the haloalkaliphilic archaeon Natronococcus occultus”

DE CASTRO, R; STUDDERT,C; HERRERA SEITZ, K. Y SÁNCHEZ,J

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; SAIB; 1995

Natronococcus occultus pertenece al grupo de las arqueobacterias haloalcalófilas que se caracterizan por vivir en ambientes de extrema salinidad y pH. Debido a las dificultades metodológicas para trabajar con proteínas halofílicas son pocas las enzimas que han sido purificadas y caracterizadas. Dentro de las proteasas, la mayoría de las estudiadas hasta el momento son extracelulares. Hemos identificado previamente dos actividades proteolíticas en N.occultus: una intracelular y una extracelular. Se estudió el efecto del stress nutricional sobre la expresión de actividades proteolíticas de N.occultus. Se realizaron mediciones del crecimiento celular y de actividad proteolítica con azocaseína y en SDS-PAGE con gelatina copolimerizada en presencia de 4 M betaína. Se observó que las actividades proteolíticas intra y extracelulares se expresan durante la fase exponencial tardía en cultivos crecidos en medio completo. El análisis electroforético en geles con gelatina mostró un perfil de bandas gelatinolíticas heterogéneo, enriquecido en el rango de PM de 50 – 120 kDa y muy similar en ambas fracciones. Células en crecimiento exponencial sometidas a un período de stress nutricional dejan de crecer y expresan solamente actividad proteolítica intracelular, compueta principalmente por bandas gelatinolíticas de bajo PM (menor de 50 kDa). Cuando el cultivo es realimentado, las bacterias reanudan el crecimiento, observándose una disminución de la actividad. Al llegar a la fase estacionaria, la actividad intra y extracelular es semejante a los cultivos crecidos en medio completo. Se concluye que el stress nutriional aumenta la expresión de proteasas intracelulare de bajo PM, no causando el mismo efecto sobre las extracelulares.