Diagnostico molecular de melanoma circulante. Optimización y validación en un modelo murino xenogenico

GABRI, MARIANO; VAZQUEZ, VALERIA; GIRON, SANTIAGO; CASTRO, MÓNICA; CINAT, GABRIELA; ALONSO, DANIEL; GOMEZ, DANIEL

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXVII reunión anual de trabajos y post asco; 2007

Sociedad Argentina de Oncología Clínica

El diagnóstico precoz del cáncer es una herramienta de importancia capital para el éxito de los tratamientos oncológicos. Basado en la actualidad en el diagnóstico por imágenes que es indicativo de la presencia de masas tumorales establecidas, el uso de técnicas de biología molecular en pos de revelar secuencias específicas de células tumorales en sangre periférica, se postula como una herramienta de diagnóstico de alta sensibilidad. En este trabajo hemos desarrollado un sistema de diagnóstico molecular basado en la detección por RT-PCR anidada del ARNm de la enzima tirosinasa humana, la cual se expresa exclusivamente en melanocitos normales y transformados. Se optimizaron las condiciones de amplificación in vitro sobre ARMm de células de melanoma humano SKmel-28, utilizando cebadores originales con diseño inter-exónico hacia la secuencia de la tirosinasa humana. Los productos obtenidos presentan 361 pares de bases (pb) en la primer ronda de amplificación (RT-PCR) y 145 pb en la segunda (PCR anidada). Los cebadores demostraron una sensibilidad de amplificación de 40 y de 1,5 pg de molde de ARNm para la primera y segunda ronda, respectivamente, siendo altamente específicos hacia la línea de melanoma humano sin manifestar resultados sobre las líneas celulares HeLa, MCF7, F3II y B16, de carcinoma cervical y mamario humanos, carcinoma mamario y melanoma murino, respectivamente. Para la evaluación in vivo se inocularon células SKmel-28 en ratones atímicos tanto por vía subcutánea como endovenosa. A partir de sangre periférica de estos animales fue posible observar la presencia de células tumorales circulantes. Este diagnóstico molecular se utilizó sobre sangre de pacientes con melanoma y voluntarios sanos, demostrando que es capaz de amplificar la presencia de tirosinasa circulante en pacientes siendo negativa en el 100% (8/8) de los voluntarios sanos. En el presente trabajo se refleja la optimización y posterior validación de un sistema diagnóstico basado en  RT-PCR anidada sobre la secuencia de tirosinasa humana demostrando ser más sensible y específico que los reportados hasta la actualidad. Esta herramienta se validó por primera vez en un modelo murino xenogénico, lográndose detectar el marcador a partir de la sangre tanto en el modelo murino como en pacientes con melanoma. Los resultados presentados resaltan la utilidad de las herramientas de amplificación molecular para el diagnóstico del melanoma que permitirían aumentar la respuesta hacia los tratamientos oncológicos de rutina.