Informe de Avance. Instituto Nacional del Cancer

LAURA TODARO

2012-11-20/2013-05-09

Biológica

Salud humana

Las primeras acciones llevadas a cabo para la puesta en marcha del proyecto tuvieron relación con la revisión minuciosa del material de trabajo. No solo en cuanto al material plástico y reactivos o consumibles sino también material biológico como las líneas celulares a utilizar. Se descongelaron y pusieron a cultivar las líneas LM38-LP (adenocarcinoma mamario murino) y sus variantes transfectadas para la sobreexpresión o silenciamiento de cada una de las isoformas de los receptores retinoides (RAR α, β y γ ). Se realizaron lisados celulares con extracción de ARN total para la amplificación por PCR de los genes de interés: RARα, RARβ y RARγ , como principales componentes del sistema retinoide. Se compraron agonistas y antagonistas para cada una de estas isoformas de receptores retinoides nucleares, procediendo a la elaboración de stocks y alícuotas de trabajo de cada uno. Se realizaron experimentos de puesta a punto de las concentraciones óptimas de uso de cada uno de estos retinoides (agonistas y antagonistas), realizando ensayos de crecimiento y medición de genes blanco por RT-PCR. Se descongelaron plásmidos de sobreexpresión de los receptores retinoides mencionados y se procedió a su amplificación en el sistema procariota, con el fin de lograr nuevas transfecciones estables en la línea LM38-LP. Se diseñaron y compraron nuevos shRNA para cada isoforma de receptores retinoides y controles con el mismo fin de lograr transfecciones estables nuevas en la línea mamaria murina. Se ensayaron diferentes potocolos de transfección sobre la línea LM38-LP utilizando en un comienzo plásmidos controles. Se completaron resultados pertenecientes a nuestra línea de trabajo principal (Sistema Retinoide en tumores de mama con características basales). Estos resultados nos permitieron la presentación a congresos nacionales e internacionales,