informe Científico Técnico de avance

TODARO, LAURA

2008-01-01/2009-09-30

Biológica

Enfermedades no endemicas

Grado de ejecución de los objetivos inicialmente planteados 1: Analizar si el tratamiento con ATRA modula la expresión y/o actividad de alguna de las isoformas de PKC. Este objetivo, se ha podido cumplir en su totalidad. 2: Analizar si existe alteración en la expresión o activación de moléculas río abajo de las PKC, cuando las células se tratan con ATRA. Se ha podido cumplir en su totalidad 3: Evaluar si la activación de las PKCs mediante PMA, sensibilizan a las células al tratamiento con ATRA. Aún no se han ensayado el tratamiento conjunto entre ATRA y PMA, pero se han transfectado en forma estable las tres líneas celulares con vectores para la sobreexpresión de PKCa PKCd y vectores vacíos para control. 4: Para discriminar la participación específica de las diferentes isoformas de PKC en los efectos modulados por ATRA, se empleará el silenciamiento farmacológico o genético de distintas isoformas de PKC. Este objetivo se encuentra en desarrollo y ya se obtuvieron resultados parciales como se indicó anteriormente. 5: Evaluar si el efecto del ATRA se debe a la interacción de la PKC con los receptores retinoideos. Aquí hemos cuantificado la actividad de los receptores ante el tratamiento con moduladores farmacológicos de la PKC como el PMA, Rottlerina y Go 6976, utilizando un gen reportero. Se están poniendo a punto el protocolo para inmunoprecipitar PKC/Receptor retinoideo. 6: Evaluar si el efecto del ATRA se produce por la unión directa del ATRA con alguna isoforma PKC en el citoplasma celula. Aun no se ha realizado. Dificultades encontradas en el desarrollo de los objetivos: En líneas generales, si bien se han realizado experimentos relacionados a casi todos los objetivos propuestos, aún faltan algunos estudios para poder completarlos en su totalidad. Se debe tener en cuenta que gran parte de este primer año de trabajo ha servido para poner a punto técnicas nuevas y ajustar algunas ya conocidas a este nuevo sistema. Las dificultades encontradas más comúnmente tuvieron relación a las etapas de “puestas a punto”, de cada una de las metodologías propuestas para el desarrollo de cada objetivo.