La expresión constitutiva de la proteína Mx A en linfocitos de pacientes estables con LLC-B está regulada por una vía de señalización dependiente de la proteína quinasa C (PKC) y de la fosfolipasa D (PLD)”

FARÍAS, E.F., TODARO, L., KOHAN, S., BESARES, F., SACERDOTE DE LUSTIG, E., AGUIRRE GHISO, J

Buenos Aires

Congreso; XIII Jornadas Multidiciplinarias de Oncología “Ángel H. Roffo”.; 1997

Inst. de oncologia A. Roffo

La proteína MxA es una GTPasa que se expresa en células infectada por ortomixovirus y puede ser inducida por el IFN-a. La vía de señalización que activa al IFN-a, a partir de la activación de la actividad tirosina quínasa de su receptor, está acoplada a la vía de la PKC en una forma fosfatidilcolina dependiente. El principal objetivo de este trabajo fue establecer si la expresión constitutiva de MxA en los linfocitos de pacientes estables con LLC-B que expresan niveles altos de esta proteína, esta regulada por la vía dependiente de la PLD y/o PKC. Se’aislaron linfocitos de sangre periférica de 8 pacientes estables o progresivos, estas células se cultivaron durante 24 h y se incubaron durante 4 h con los siguientes tratamientos diluidos en medio RPM!: 1) 0.01% DMSO, 2)1-10 mM PMA, 3)1-100 uM H7, 4)10-50 uM genisteína (GST), 5) 0.3-0.8 % n-butanol y 6) ng/ml de ácido fosfatídíco (PA). Se prepararon lisados celulares en presencia de S.DS e inhibidores de proteasas. Se precipitaron las proteínas con etanol 100% a -3 0°C durante 30 mm. Posteriormente se detectó la expresión de la proteína MxA mediante la técnica de westem biot y se realizó un análisis densitométrico de dicha expresión. La GST, in inhibidor especí de tirosina quinasas, inhibió la expresión de MxA en todos los pacientes estables. El PMA un activador específico de la PKC estirnuló la expresión de la MxA en todas las dosis, el H7, un inhibidor específico de la PKC inhibió su expresión en todos los pacientes estables. El sustrato alternativo de la PLD, el n-butanol, descrito como un inhibidor de las vías dependientes de la PLD, inhibió la expresión de la MxA en todos los pacientes estables, mientras que el PA, producto de la actividad PLD, estimuló su expres ón. Es interesante que, aunque los pacientes progresivos mostraron una respuesta inversa en los tratamientos con PMA y GST para la expresión de Mx.A, no se observo ninguna modulación por el n butanol y el PA. Estos resultados demuestran que la expresión MxA en los pacientes estables con LLC-B está regulada por la vía de la PLD-PKC probablemente activada por la actividad tirosina quinasa del receptor del ¡FN-a. Los resultados cte los pacientes con enfermedad progresiva sugieren que podría existir una regulación diferencial de la expresión MxA. Finalmente el análisis cte la regulación de la expresión de MxA podría aportar datos de utilidad para detectar pacientes sensibles o no para el tratamiento con IFN-a. o