Rol de los receptores retinoicos α y γ en el crecimiento celular y en el mantenimiento y renovación de células stem/progenitoras en una línea celular de cáncer mamario murino

FLUMIAN; BERARDI; DIAZ BESSONE; CIRIGLIANO; BAL DE KIER JOFFÉ; URTREGER; TODARO

Jornada; Jornada de Oncología A.H. Roffo; 2013

Objetivo: En la actualidad, los retinoides (Rds) están siendo evaluados en ensayos clínicos para el tratamiento y la prevención del cáncer dado su rol en la regulación del crecimiento y la diferenciación celular. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la activación de las isoformas de los receptores de ácido retinoico (RAR), RARα y RARγ en la regulación del crecimiento celular, su impacto en la modulación de la proporción de células luminales (LEP) vs. mioepiteliales (MEP) y sus implicancias en el mantenimiento y crecimiento de células con características stem/progenitoras. Materiales y métodos: Como modelo se utilizó la línea celular LM38-LP, derivada de un tumor mamario murino, que expresa todos los RARs funcionales y que está formada por células luminales (LEP), células mioepiteliales (MEP) y células con características stem/progenitoras (MSC). Capacidad proliferativa: se evaluó por recuento directo de células LM38-LP tratadas por 144 hs con diferentes retinoides y sus combinaciones: ATRA, AM580 (agonista RARα), MM (antagonista RARγ) AM580+MM, Ro41 (antagonista RARα), BMS (agonista RARγ) y Ro41+BMS. Citometría de flujo: células LM38-LP fueron tratadas con los retinoides y luego marcadas con Ac anti CD24 y anti CD29 y se determinó el porcentaje de las poblaciones CD24+ CD29+ y CD24- CD29+. Formación de mamosferas: en placas de baja adhesión de 35 mm se sembraron 10000 células LM38-LP previamente tratadas con los distintos retinoides y sus combinaciones. Los cultivos se desarrollaron en ausencia de suero y en presencia de B27. Luego de diez días se conto el número de mamosferas y se midió su diámetro mayor. Resultados: Tanto el AM580 (agonista RARα) como el tratamiento combinando AM580 con MM (antagonista RARγ) disminuyeron la capacidad proliferativa de las células LM38-LP luego de 144 hs. Los tratamientos con MM, Ro41 (antagonista RARα), BMS (agonista RARγ) y sus combinaciones no tuvieron efecto en la proliferación. Mediante citometría de flujo pudimos determinar que todos los retinoides disminuyeron la relación LEP/MEP (CD24+CD29+/CD24-CD29+). En relación a las células con características stem/progenitoras, mediante el ensayo de formación de mamosferas, pudimos determinar que los tratamientos con AM580, MM, AM580+MM y BMS+Ro41 aumentaron el número de mamosferas. Mientras que los tratamientos con BMS, Ro41 y BMS+Ro41 aumentaron el tamaño de las mamosferas, sólo el AM580 indujo el efecto opuesto. Conclusiones: En conclusión, tanto RARα como RARγ disminuyen la proporción de LEP vs. MEP pero sólo RARα induce inhibición del crecimiento. Además, RARα estaría participando en la supervivencia de las células stem/progenitoras mientras que RARγ estaría involucrado en el crecimiento de este componente celular.