13. Caracterización del DNA de los corpúsculos simbióticos de la glándula digestiva de Pomacea canaliculata

ISRAEL A. VEGA, ALFREDO CASTRO-VAZQUEZ

Uspallata, Mendoza

Taller; P.O.M.A.C.E.A.; 2003

IHEM-CONICET

Los individuos adultos de P. canaliculata (Lamarck 1822; Caenogastropoda, Ampullariidae) eliminan dos tipos de corpúsculos fecales (Andrews, 1965; Castro-Vazquez et al., 2002; Koch et al., enviado): los corpúsculos C son cuerpos redondos de color amarillo verdoso (diámetro 14 mm) y están delimitados por una gruesa pared celular; 2) los corpúsculos K son cuerpos en forma de clava de color marrón oscuro (aproximadamente  35 mm de longitud y 14 mm de ancho). Ambos tipos de corpúsculos se originan en los alvéolos de la glándula del intestino medio. Mediante análisis morfológico y la detección de DNA en estos corpúsculos, hemos propuesto que los corpúsculos C podrían ser la forma vegetativa de un simbionte procariota, mientras que los corpúsculos K han sido interpretados como la forma quística de aquel simbionte (Castro-Vázquez et al., 2002). Hemos desarrollado un método de aislamiento de estos corpúsculos, con el objetivo de: 1) determinar la extensión de ocupación de la glándula por estos corpúsculos, 2) cuantificar el contenido de DNA por corpúsculo C; 3) determinar la relación DNA/proteína en los corpúsculos C y su comparación con los corpúsculos K y algunas células eucariota y procariota; 4) detección de una secuencia generalizada de origen bacteriano en el DNA extraído de los corpúsculos C, a través de la reacción en cadena de la enzima polimerasa (PCR). Como resultado del método de fraccionamiento se obtuvieron dos fracciones: la fracción C y cuyos porcentajes de pureza fueron de 91.6 + 0.8 %  (media + ES, N=20) y 99.4 + 0.3 % (N=20). El 8.4 % de contaminación de la fracción C se debe fundamentalmente a la presencia de corpúsculos no empaquetados totalmente y de pequeño tamaño, que podrían representar formas de transición entre ambos tipos de corpúsculos. Al microscopio electrónico, los corpúsculos C aparecen bien preservados, similar a aquellos encontrados en las células columnares. Estos cuerpos son esféricos (alrededor de 13 mm de diámetro), contienen gránulos pequeños y grandes y están rodeados por una membrana externa y una pared celular electrodensa. Por otro lado, la fracción K mostró corpúsculos K multilamelares y sólidos, pero en algunos casos se pudo observar la pérdida de las lamelas externas. El contenido de DNA por corpúsculo C fue de 57 ± 9 fg (N=11). Estos datos se encuentran moderadamente por encima del tamaño de genoma descrito hasta la fecha que corresponde a la cianobacteria Nostoc punctiforme (10.56 fg por célula; Cole & Saint-Girons, 1999). Hemos detectado DNA en los lisados de las fracciones C y K, confirmando los estudios preliminares (Castro-Vázquez et al., 2002). Sin embargo, la relación DNA/proteína de los corpúsculos C fue significativamente mayor que la correspondiente a los corpúsculos K (53.5 ± 14.2 mg/mg, N=11, y 6.9 ± 2.5 mg/mg, N=11, respectivamente; Prueba “t” de Student, P<0.05). También, la relación DNA/proteína de los corpúsculos C fue comparada con células procariotas (Escherichia coli, Synechococcus sp.) y células eucariota (leucocitos humanos y células Hep-2). Solamente los leucocitos produjeron una relación DNA/proteína significativamente más baja (comparado con los restantes tipos de células estudiadas, ANOVA I, Newman-Keuls test). La PCR nos permitió reconocer una secuencia de DNA ribosomal 16S propia de las bacterias; este hallazgo es consistente con la ausencia morfológica de un núcleo propiamente dicho y lo comentado en los puntos 2 y 3 precedentes.