Caracterización de la actividad proteasa a lo largo del intestino del caracol de agua dulce Pomacea canaliculata.

MARTÍN S. GODOY E ISRAEL A. VEGA

Puerto Madryn

Congreso; VIII Congreso Latinoamericano de Malaclología; 2011

Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco

El presente reporte es parte de un programa que trata de la biología de un endosimbionte el cual se encuentra dentro de las células epiteliales de la glándula digestiva de Pomacea canaliculata. Nosotros hemos revisitado la fisiología digestiva de este caracol ya que previamente se reportó la ausencia de actividad proteasa en el intestino de ampuláridos y además, porque el simbionte presenta una importante actividad proteasa intrínseca, la cual podría participar de la digestión extracelular de proteínas durante su pasaje a través del intestino del caracol. Adicionalmente, se ha reportado que la glándula digestiva puede acumular diferentes metales del agua de cultivo, por ello, nos preguntamos si la calidad del agua pudiese afectar la activad de las proteasa de origen glandular. Los objetivos de este trabajo son (1) examinar los cambios de actividad proteasa específica a lo largo del intestino (contenidos del buche, gástrico e intestinal), (2) determinar la sensibilidad de la actividad proteasa a inhibidores específicos de grupo, (3) determinar la temperatura óptima de acción de las proteasas y (4) evaluar la calidad de agua de cultivo (agua de red vs una solución salina libre de metales pesados) sobre la actividad proteasa específica glandular. La actividad proteasa específica (mUI/mg proteínas) cambió a lo largo del intestino de Pomacea canaliculata, siendo significativamente mayor en el intestino contorneado respecto del contenido del buche y gástrico (ANOVA, p < 0.05). Ningún cambio de actividad fue observado en la actividad específica glandular de animales cultivados desde el nacimiento en agua de red o solución salina (Student Test, p < 0.05). Aprotinina, un inhibidor de serín-proteasas, fue activa en los contenidos del buche y gástrico inhibiendo el 60% de la actividad proteasa específica, mientras que los inhibidores E64 (cisteín-proteasas), pepstatina (aspártico-proteasas), y EDTA (metaloproteasas) no lo fueron. Además aprotinina inhibió las proteasas de 32, 130 y 150 kDa encontradas a lo largo del intestino. Por su parte, la temperatura óptima de acción de la proteasas observadas a lo largo del intestino varió entre los 30 y 35ºC. Estos hallazgos nos permiten concluir que la digestión extracelular de proteínas en P. canaliculata no es insignificante y se lleva a cabo a través de serín proteasas con temperaturas óptimas entre 30 y 35ºC.