Método para la obtención de odontoblastos de rata y su uso en cultivos.

PL PEREZ; IP RODRIGUEZ SANTOS; HF CANTIELLO; MR CANTERO

Mar del Plata

Congreso; XLVI Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Odontológica.; 2013

OBJETIVO: Los odontoblastos tendrían un papel central en la sensación del dolor dental, del que poco se sabe. En este estudio, hemos diseñado un nuevo método para la obtención rápida de odontoblastos pulpares de rata, su posterior mantenimiento en cultivo, y el estudio de sus propiedades eléctricas mediante técnicas electrofisiológicas. METODOS: Se extrajeron los cuatro incisivos de cada rata Wistar adulta (n = 15). Los dientes se dividieron en dos grupos que se incubaron por 20-28 hrs en solución de HCl 0,5 M o 1 M (10 mL), respectivamente. Una vez disuelto el esmalte, las pulpas dentales se extrajeron por disección en condiciones estériles y se colocaron en placas de Petri conteniendo DMEM suplementado con 3% suero fetal bovino. Los odontoblastos fueron disgregados por aspersión, y distribuidos en tres grupos: sobre superficie plástica, y sobre cubreobjetos cubiertos con y sin poli-lisina. Las muestras se mantuvieron a 37oC en estufa de cultivo con 5% presión de CO2 en aire. Las células se observaron por contraste de fase, bajo microscopio invertido (Olympus IX71). RESULTADOS: La pulpa dental fue fácilmente extraída de los incisivos a las 20 hs para dientes sumergidos en HCl 1 M (4/4), mientras que para aquellos sumergidos en HCl 0,5 M se requirieron 28 hs para obtener resultados similares (56/56). El explante obtenido era rico en odontoblastos, lo que se comprobó por su morfología, incluidas la presencia de procesos y cilio primario. Los odontoblastos se mantuvieron viables en cultivo durante al menos 10 días, lo que se confirmó por tinción con el colorante vital Azul de Metileno (0,1%, Anedra) y permeabilización con Tritón-X (0,1%, Mallinckrodt). Los vidrios recubiertoscon poli-lisina fueron los que permitieron una mayor adherencia de los odontoblastos. CONCLUSION: Hemos desarrollado un método fácil para la obtención de odontoblastos viables para su cultivo y manipulación. Los odontoblastos adheridos a cubreobjetos con poli-lisina hacen accesibles experimentos de patch clamp, que se han iniciado en el laboratorio.