Corrientes Catiónicas Mediadas por la Policistina 2 (TRPP2) en Células Epiteliales Renales LLCPK1

PEREZ PL; SCARINCI MN; SMOLER M; DAI XQ; CANTERO MR,; CANTIELLO HF.

Conferencia; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS).; 2016

La policistina-2 (PC2, TRPP2) es un canal catiónico no selectivo que pertenece a la superfamilia TRP (Transient Receptor Potential), cuya disfunción genera la poliquistosis renal autosómica dominante (PQRAD). La PC2 contribuye al transporte de Ca2+ y a la señalización celular en epitelios renales y otros tejidos. La PC2 se ha observado en la membrana celular, el retículo endoplásmico y el cilio primario, ubicación esencial en la génesis de la PQRAD. Estudios previos han determinado la función de la PC2 en células con sobre-expresión heteróloga. Al presente, no existe información sobre la función de la PC2 endógena en la membrana plasmática de las células epiteliales renales. En este estudio, aplicamos la configuración de célula entera, ?whole-cell? (W/C) con fijación de voltaje ?patch-clamp?, e inmunocitoquímica a células de la línea epitelial renal LLC-PK1, para establecer la contribución de la PC2 endógena a la conductancia celular. Las corrientes W/C ligeramente rectificantes en condiciones de alto K+ intracelular, alto Na+ externo y Ca2+ externo normal (1,2 mM), aumentaron en un 38,1% por aumento del Ca2+ externo a 6.2 mM (9.46 ± 0.23 nS/cell, n = 24 vs. 13.06 ± 0.67 nS/cell, n = 17, p < 0.01). Estas corrientes se redujeron en un 65,2% por diálisis intracelular con anticuerpo anti-PC2 activo (contra epítope C-terminal, PolyFast, Zymed Laboratories, Inc), pero no previamente desnaturalizado por calor. Se confirmó la presencia de PC2 en la membrana plasmática por inmunolocalización de células no permeabilizadas, con anticuerpo anti-PC2 contra epítope externo de la proteína (#55600, Abcam). La contribución funcional de la PC2 a la conductancia celular observada, se estableció por inhibición de la expresión génica de la PC2 con sondas anti-sense de ARN contra el exón 3 del ARNm para la producción de la proteína, que produjo una inhibición del 62% en las corrientes W/C. Los datos del presente reporte proveen la primera evidencia experimental de corrientes endógenas de PC2 a nivel de la membrana celular, lo que confirmaría esta vía de influjo de Ca2+ y posible regulación del potencial de membrana celular en células epiteliales de origen renal. La presencia de PC2 funcional en la membrana celular del modelo epitelial renal LLC-PK1 permitirá explorar los posibles mecanismos para la regulación de la PC2 que contribuyen a las disfunciones presentes en PQRAD. Estos estudios pueden también tener importantes implicaciones para la fisiología de las células epiteliales renales.