Nanopartículas poliméricas portadoras de anandamida y su potencial efecto como droga antihipertensiva

VIRNA MARTÍN GIMENÉZ; LUCÍA FUENTES; DANIELA RAMIREZ; WALTER MANUCHA; GRISELDA EDITH NARDA; MARCOS RUSSO; CARLOS GAMARRA-LUQUES; LUCIANA MAZZEI; DIEGO KASSUHA; ; ALEJANDRA CAMARGO; VIRNA MARTÍN GIMENÉZ; LUCÍA FUENTES; DANIELA RAMIREZ; WALTER MANUCHA; GRISELDA EDITH NARDA; CARLOS GAMARRA-LUQUES; DIEGO KASSUHA; MARCOS RUSSO; LUCIANA MAZZEI; ; ALEJANDRA CAMARGO

Buenos Aires

Congreso; 39º Reunión anual del consejo argentino de hipertensión arterial; 2018

Consejo Argentino de Hipertensión Arterial

Introducción Los cannabinoides y sus derivados inducen importantes efectos hipotensores, pero simultáneamente manifiestan serios efectos secundarios. De interés, la nanotecnología posibilitaría su liberación controlada con reducción de reacciones adversas, lo que permite un inédito enfoque para el desarrollo de nuevas terapias antihipertensivas. Específicamente, anandamida (AEA) -un endocannabinoide- modula los niveles del óxido nítrico (NO) en células de la rama gruesa ascendente del asa de Henle mediante la activación de receptores tipo 1 (CB1) y la subsecuente señalización de la enzima óxido nítrico sintasa (NOS). El NO producido bloquearía los transportadores apicales de sodio en estas células favoreciendo la natriuresis. De interés, se conoce que células renales humanas pertenecientes al túbulo proximal (HK2) expresan CB1 y que la bomba Na+/K+ ATPasa -presente en su membrana basolateral- es uno de los transportadores más importantes responsables del mantenimiento de volumen y composición del fluido extracelular. Objetivos Sintetizar nanopartículas de anandamida/ε-policaprolactona (Nps-AEA/PCL) mediante la técnica de electrospraying, caracterizarlas en cuanto a sus propiedades fisicoquímicas y evaluar su actividad biológica in vitro en cultivos de HK2. Por otro lado, procuramos comparar actividad biológica y toxicidad entre las nanopartículas portadoras de AEA respecto a AEA sola. Materiales y Metodologías Obtuvimos nanopartículas cargadas con AEA sometiendo una solución polimérica al 0,5% p/p de PCL en acetona a la cual se le adicionó AEA (flujo de 0,5 ml/h y voltaje de 10 kV). Determinamos morfología, tamaño, propiedades térmicas, interacciones fármaco-polímero y estabilidad física mediante Microscopía Electrónica de Barrido (SEM), Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC), Termogravimetría (TG) y Espectroscopías Infrarroja por Transformada de Fourier y UV-Visible. Además, se trabajó por triplicado con seis cultivos de células HK2: control, Nps-PCL sin AEA, Nps-AEA/PCL (1 μM y 10 μM) y AEA libre (1 μM y 10 μM). Luego de 24 hs de tratamientos, se determinó la expresión de iNOS (Western blot), niveles de NO (nitritos por Griess) y actividad Na+/K+ ATPasa (colorimétricos). Empleamos MTT con ensayo de toxicidad celular.Resultados Las nanopartículas presentaron un predominio de tamaño entre 200 y 400 nm (análisis SEM). Los ensayos térmicos y espectroscópicos demostraron la encapsulación estable de AEA en las Nps-AEA/PCL. Por su parte, los estudios in vitro evidenciaron la capacidad de las Nps-AEA/PCL para inducir la expresión de iNOS, los niveles de NO y reducir la actividad Na+/K+ ATPasa en células HK2, de forma dosis-dependiente. De interés, verificamos toxicidad celular con AEA sola, mientras que las Nps-AEA/PCL no lo evidenciaron.Conclusiones y perspectivasLa técnica de electrospraying posibilitó la obtención de Nps-AEA/PCL con atractivas propiedades fisicoquímicas capaces de suministrar AEA en forma controlada y libre de toxicidad. También demostramos la capacidad de las Nps-AEA/PCL para disminuir la actividad de Na+/K+ ATPasa a nivel renal (células HK2) en un mecanismo relacionado con el aumento de la expresión de iNOS y biodisponibilidad del NO. Este hallazgo nos permitiría sugerir un potencial efecto natriurético/diurético de Nps-AEA/PCL. Por lo tanto, esta formulación nanotecnológica constituiría una novedosa y prometedora alternativa terapéutica que debería ser considerada para el tratamiento de la hipertensión arterial.