Leucocitos humanos expresan mRNA de la isoforma corta 1b del receptor de prolactina

MUSSI, JESSICA; RECALDE, GABRIELA; YUDICA, FLORENCIA; QUINTERO, CRISTIAN ANDRÉS; QUILES, ROMINA; MACKERN OBERTI, JUAN PABLO

Bariloche

Congreso; Congreso de Bioquimica CUBRA XIV 2017; 2017

CUBRA

Introducción: Debido a la falta de terapias eficientes para el tratamiento de enfermedades autoinmunes sistémicas es necesario diseñar nuevas alternativas que apunten a solucionar este problema. El desarrollo de nuevos test pronósticos basados en la expresión de ARNm de moléculas inhibidoras como por ejemplo PD-L1, CTLA-4 y receptores hormonales como receptor de prolactina beneficiarán el buen uso de terapias para el tratamiento de enfermedades autoinmunes. Objetivos: el objetivo de nuestro trabajo fue validar la determinación de la cuantificación de mRNA para el receptor de prolactina para su futura utilización como posible marcador pronóstico de enfermedades autoinmunes. Metodología: Para llevar a cabo nuestro objetivo se utilizó una línea celular de cáncer de mama humana denominada MCF7 la cual expresa altos niveles del receptor de prolactina. Además se utilizaron 3 muestras de leucocitos de sangre periférica de voluntarios sanos. Se obtuvo ARN total de todas las muestras analizadas mediante la técnica de TRIZOL. Luego se sintetizó ADN copia con posterior amplificación por PCR. Los productos fueron visualizados en geles de agarosa revelados con SYBRGold. Se utilizaron primers específicos para la determinación de la isoforma larga del receptor de prolactina (PRL-RL, Fw, CCTTGTCCAGGTTCGCTGCAAA; Rv, AGATGAGCATCAAATCCT TTTA), actina (Fw, AAAGACCTGTACGCCAACAC; Rv, GTCATACTCC TGCTTGCT GAT) e isoforma corta del receptor de Prolactina (PRL-RS1b, Fw, TAAATGGTC TCCACCTACCCTGAT; Rv, CACCTCCAACAGATGAGCATCAAATCC). Resultados: logramos satisfactoriamente determinar que células MCF7 expresan ARNm del PRL-RL, pero no asi el PRL-RS1b. También se reporta por primera vez la presencia de PRL-RS1b de las muestras de leucocitos humanos los cuales también expresan PRL-RL.Conclusiones: La expresión de PRL-RS1b en leucocitos indica que, de forma contraria a lo esperado, podría inhibir la activación celular inducida por prolactina mediada por PRL-RL-prolactina. En pacientes con enfermedades autoinmunes se desconoce cómo se encuentra la expresión de ARNm de PRL-RS1b indicando que podría ser utilizada como biomarcador de autoinmunidad.