Interacción Nox4/Hsp70/CHIP en cultivo primario de células epiteliales de túbulos proximales de ratas SHR. Efecto de Losartan

LOPEZ APPIOLAZA CM; GIL LORENZO AF; BOCANEGRA V; BENARDON ME; CACCIAMANI VE; VALLÉS P

Buenos Aires

Congreso; XIX Congreso Argentino de Hipertensión Arterial; 2012

Sociedad Argentina de Hipertensión Arterial (SAHA)

Introducción:La señalización de Angiotensina II (AII) involucra la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) derivadas del complejo NAD(P)H-oxidasa. Nox4 se expresa en células epiteliales tubulares proximales (TP) Hsp70 protege ante el estrés oxidativo y participa en el transporte de proteínas a localizaciones intracelulares específicas.CHIP es una ligasa de Hsp70 y ubiquitina E3; interviene en la ubiquitinación, agregación y degradación proteica. Objetivo. Analizar el efecto de Losartan sobre expresión de Hsp70 y CHIP en células TP y su participación en la regulación de la expresión de Nox4 Materiales y Métodos: Cultivo primario de células PT derivadas de animales SHR de 6 semanas, controles WKY y cultivos HK2, fueron estimuladas con AII 1x10-7M durante 15min o previamente tratadas con Losartan 1x10-5M durante 30 y 90 min en medio libre de suero. Cultivos sin tratar se utilizaron como control.La expresión de proteínas fue analizada por Western blot y su interacción por inmunoprecipitación e inmunofluorescencia (microscopía confocal). A fin de corroborar que la chaperona Hsp70 esta involucrada en la regulación de la expresión la subunidad Nox4, realizamos en cultivo primario de células PT y en células HK2 la transfección de un vector plasmídico que contiene la secuencia de silenciamiento de Hsp70.