HSP70 EN LA REGULACIÓN DEL COMPLEJO NOX4/P22 NAD (P)H-OXIDASA EN CÉLULAS DEMÚSCULO LISO VASCULAR DE RATAS ESPONTÁNEAMENTE HIPERTENSAS (SHR). EFECTO DE LA INHIBICIÓN DEL RECEPTOR AT1 DE ANGIOTENSINA II”

GIL LORENZO ANDREA; BOCANEGRA VICTORIA; CACCIAMANI VALERIA; BENARDON MARIA EUGENIA; MIATELLO ROBERTO; VALLES PATRICIA

Congreso; XXXI Reunión anual científica del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial (CAHTA). “Dr. Eduardo Brawn Menendez”. Sociedad Argentina de Cardiología.; 2010

Objetivo. Estudio de la participación de Hsp70 en la regulación de las subunidades NAD(P)H-oxidasa Nox4 y p22 phox involucrando a la vía de señalización de GTPasas pequeñas Rho, Cdc42 y Rac luego de la administración de Losartan en CMLVs. Métodos. Cultivos primarios de CMLV obtenidos a partir vasos de resistencia de SHR y WKY se utilizaron en pasajes 3 al 9, al 100% de confluencia en medio deprivado de suero. Se conformaron cuatro grupos: Control (C), Angiotensina II (AII: 100 µmol/L), Losartan (L: 100 µmol/L) y Losartan más Angiotensina II (L+AII: en las mismas concentraciones). Las CMLV fueron estimuladas con AII durante 15, 60, 120, 180 min, 24 y 48 h, en presencia o ausencia de Losartan. Las células tratadas sólo con Losartan permanecieron expuestas al inhibidor durante 45, 90, 150, 210 min y 24 o 48 h. La expresión y activación de las proteínas se analizaron en fracción  citosólica y de membrana por WB. La interacción de subunidades de NAD(P)H-oxidasa con Hsp70 y GTPasas pequeñas fue analizada mediante coinmunoprecipitación e inmunofluorescencia (microscopía confocal). Resultados. En CMLV de WKY demostramos translocación de Hsp70 a membrana a los 15 min de estimulación con AII, descendiendo su expresión luego de 60 min de exposición a Losartan. En SHR la translocación de Hsp70 a membrana ocurre a los 90 min de exposición a Losartan asociado al incremento en la expresión de Cav-1. La prolongación del tratamiento por 150, 210 min, 24 y 48 h mostró descenso de la expresión de Hsp70 en membrana. Tratamiento con Losartan por 90 min mostró coinmunoprecipitación de Nox4 con Hsp70, así como también interacción con p22, Cdc42 y Rho en fracción de membrana. La interacción mostró un descenso marcado de la expresión de p22 y de la expresión y activación de las proteínas Rho A y Cdc42, respecto de células estimuladas con AII. El tratamiento con Losartan (90 min) demostró colocalización de Hsp70 y p22 por inmunofluorescencia. La activación temprana  de las vías de señalización de las MAPK ERK1/2 y p38 ocurrió en células estimuladas 15 min con AII, efecto inverso se obtuvo mediante  tratamiento con Losartan por 45 min. Conclusión. Demostramos que la inhibición del AT1R conduce a la translocación e incremento de la expresión de Hsp70 en fracción de membrana de CMLV de SHR. Hsp70 translocada, interviene en la regulación negativa del complejo Nox4/p22 NAD(P)H-oxidasa e inhibe la activación de Rho A y Cdc42, efectos que sugieren la participación de la chaperona en la estabilización del citoesqueleto.