"Pubertad y neuroesteroides: allopregnanolona y su efecto sobre la liberaci¨®n de neurotransmisores claves en el hipot¨¢lamo de la rata hembra".

GIULIANI FERNANDO

Mendoza

Encuentro; Primer encuentro de investigadores de la RADU; 2011

Red Andina de Universidades Privadas (RADU)

La pubertad en ratas comienza con un aumento en la liberaci¨®n puls¨¢til de LHRH, y se hace evidente con la aperura vaginal (AV). Este proceso es controlado por la liberaci¨®n de neurotransmisores como GABA y Glutamato, en el hipot¨¢lamo medial basal (HMB) y ¨¢rea pre¨®ptica anterior (APO), y es modulada a su vez por neuroesteroides, tales como allopregnanolona (Allo). En trabajos previos de nuestro laboratorio, hemos demostrado que Allo incrementa la liberaci¨®n LHRH y glutamato en HMB/APO de ratas adultas ovariectomizadas. Sin embargo poco se sabe de los efectos de Allo en etapas anteriores del desarrollo reproductivo como durante el establecimiento de la pubertad. En este trabajo nuestros objetivos fueron: 1) determinar la expresi¨®n g¨¦nica de la enzima 3¦Á-hidroxiesteroide ¨®xido reductasa (3¦Á-HOR), que cataliza la s¨ªntesis de allopregnanolona, en HMB/APOs de ratas prep¨²beres (30d), en apertura vaginal y p¨²beres (55d), 2) medir la actividad enzim¨¢tica de 3¦Á-HOR en los mismos estad¨ªos y 3) determinar si Allo modula la liberaci¨®n de GABA y Glutamato en HMB/APOs de ratas en esos tres estad¨ªos. Metodolog¨ªa: 1) A partir del mRNA de HMB/POAs de ratas en los tres estad¨ªos, se amplific¨® por RT-PCR a 3¦Á-HOR usando cebadores espec¨ªficos; 2) Se homogenizaron HMB/APOs de ratas en los tres estad¨ªos y se realiz¨® el ensayo enzim¨¢tico de 3¦Á-HOR por medici¨®n espectrofotom¨¦trica de la oxidaci¨®n de NADPH; 3) Se usaron HMB/POAs de ratas en los tres estad¨ªos de estudio, a los que se realizaron ensayos de liberaci¨®n de [3H]-GABA y [3H]-Glutamato, evocados por K+ 28mM, superfundi¨¦ndolos con buffer en presencia o ausencia de Allopregnanolona 120nM. Resultados: 1) La expresi¨®n g¨¦nica de la enzima 3¦Á-HOR aumenta ratas p¨²beres (55d) con respecto a los otros dos grupos de estudio; 2) La actividad enzim¨¢tica de 3¦Á-HOR, aumenta tambi¨¦n en ratas p¨²beres (55d) con respecto a los otros dos grupos de estudio, 3) Allopregnanolona estimula la liberaci¨®n de [3H]-GABA s¨®lo en el grupo de ratas p¨²beres y de [3H]-Glutamato tanto en ratas p¨²beres como en apertura vaginal. Concluimos que: 1) Allo influye en la liberaci¨®n de GABA durante la pubertad y Glutamato tanto en la pubertad como en la apertura vaginal, lo cual podr¨ªa ser clave para el inicio y mantenimiento de estos procesos fisiol¨®gicos; 2) Esta observaci¨®n se ve reforzada por el hecho de que la s¨ªntesis de este neuroesteroide parece estar aumentada durante estos estad¨ªos y 3) Allopregnanolona ser¨ªa un importante factor regulatorio durante el desarrollo puberal.