Efecto inhibitorio de proteínas de Capa-S de Lactobacillus kefir sobre la acción in vitro de toxinas de Clostridium difícile

CARASI, P; TREJO, F; DE ANTONI, G.L; PÉREZ, P; SERRADELL, M.A

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología – VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica.; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

La Capa-S es una estructura cristalina macromolecular (glico)-proteica que recubre la superficie de bacterias de diferentes géneros y especies. Se le han atribuido diferentes funciones, entre las que se encuentra la participación en procesos de adhesión y en la protección contra patógenos. Nuestro laboratorio cuenta con cepas potencialmente probióticas de Lactobacillus kefir, cuyas proteínas de Capa-S muestran una gran heterogeneidad estructural y confieren diferentes propiedades superficiales a las células enteras. Clostridium difficile es un bacilo Gram-positivo causante de diarreas asociadas al uso de antibióticos, y sus principales factores de virulencia son las toxinas A y B. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la capacidad inhibitoria de proteínas de Capa-S provenientes de cepas de L kefir sobre la acción de las toxinas de C. difficile sobre células en cultivo. Se realizaron ensayos de citotoxicidad sobre monocapas de células Vero (fibroblastos de riñón de mono), empleando el sobrenadante de cultivo de una cepa de C. difficile como fuente de toxinas A y B. Las células fueron incubadas con diluciones seriadas del sobrenadante de C. difficile durante 16 h a 37 °C y 5% de CO2 en presencia o no de proteínas de Capa-S provenientes de 4 cepas de L. kefir (0,05-0,15 mg/ml) o de las respectivas bacterias enteras (DO=4 y 8). El efecto citotóxico se determinó cuantificando el desprendimiento celular mediante la técnica de tinción con cristal violeta. Se evaluó la influencia de la preincubación sobrenadante C. difficile - Capa S/bacteria durante 1 hora a 37 °C sobre la capacidad inhibitoria. La capacidad de unión de toxinas por las bacterias enteras se analizó mediante dotblot con anticuerpos específicos anti-toxinas A y B. En primer lugar, sólo las proteínas de Capa-S fueron capaces de ejercer un efecto antagónico, mientras que no se observó inhibición al realizar los ensayos de citotoxicidad con las bacterias enteras. Sin embargo, se observó interacción entre las bacterias y las toxinas A y B mediante dot-blot. De las 4 proteínas de Capa-S estudiadas, la cepas CIDCA 83115 y CIDCA 8348 fueron las que ejercieron un efecto antagónico mayor (se duplica la concentración de sobrenadante necesaria para producir el 50% de desprendimiento celular), mientras que las proteínas provenientes de las cepas CIDCA 8321 y CIDCA 8345 no fueron capaces de inhibir significativamente el efecto citotóxico. A su vez, la preincubación del sobrenadante de C. difficile con las proteínas de Capa-S potenció el efecto inhibitorio ejercido. Estos resultados sugieren que las proteínas de superficie (Capa-S) están implicadas en los mecanismos de inhibición de la acción citotóxica de C. difficile por cepas probióticas de L. kefir, los que a su vez dependen de la estructura de dichas proteínas.