Producción y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-flagelina

HIRIART, Y; GONZÁLEZ MACIEL, D; SERRADELL, M; RUMBO, M

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIV Reunión Anual de SAIC - LVII Reunión Anual de SAI; 2009

SAIC - SAI

Flagelina constituye el flagelo bacteriano y es reconocido por los receptores de inmunidad innata TLR5, Naip5 e IPAF, por lo que resulta un candidato para ser empleado como adyuvante vacunal. Usualmente, se purifica a partir de una suspensión bacteriana densa por desprendimiento mecánico de los flagelos y posterior recuperación por ultracentrifugación. Las preparaciones de flagelina pueden resultar contaminadas con LPS u otros productos microbianos activadores de otras vías de la respuesta innata. El objetivo de este trabajo es producir y caracterizar anticuerpos monoclonales (AcMo) anti-flagelina, a fin de mejorar los sistemas de purificación disponibles. Se inmunizaron vía s.c. ratones BALB/c con 1 ug FliC (procedente de S. typhimurium) en hidróxido de aluminio en 300 ul PBS (días 0 y 15). Se palicó un boost a día 30 con 1 ug FliC en 300 ul PBS. Al día 33 se realizó la fusión. Se obtuvieron 4 hibridomas en distintas fusiones que fueron subclonados, producidos en cantidad y purificados en columna de proteína A. Los AcMo 2D11A1 son isotipo IgG2a mientras que 2B3H10, 4C1H7 y 5B4H2 resultaron isotipo IgG1. No se observó reactividad por ELISA contra flagelinas de otras especies microbianas distintas a la de S. typhimurium. En ELISA contra FliCD3, una variante carente del dominio antigénico, 2B3H10 y 4C1H7 resultaron positivos. Se evaluó la capacidad de bloqueo de actividad biológica de FliC sobre células Caco ccl20-luciferasa. 2B3H10 y 4C1H7 bloquearon el efecto de flagelina, aunque 4C1H7 lo hizo a concentraciones mayores, indicando diferencias en la interacción. Empleando los AcMo biotinilados en ELISA de competición, no se observó desplazamiento de entre los distintos AcMo obtenidos por lo que podría descartarse el reconocimiento de epitopes solapados. En conclusión, se obtuvieron y caracterizaron 4 monoclonales anti-FliC de especificidad adecuada para ser utilizados en cromatografía de afinidad a fin de mejorar las preparaciones de flagelina obtenidas en nuestro laboratorio.