Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales contra antígenos de Giardia intestinalis

SERRADELL, MA; HUMEN, M; PÉREZ, P

Córdoba, Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología – Asociación Argentina de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

La infección por Giardia intestinalis es una parasitosis que afecta el tracto gastrointestinal. LA giardiasis puede ser sintomática, pudiendo llegar a carusar síndorme de mala absorción alimentaria, a cursar en forma asintomática. Actualmente el diagnóstico de la enfermedad se realiza mediante examen microscópico en busca de quistes o trofozoítos del parásito en materia fecal. Sin embargo, existen ensayos comerciales para la detección de antígenos de G. intestinalis en materia fecal, los cuales muestran buena sensibilidad, pero su elevado costo los hace de difícil acceso sobre todo en organismos de salud pública. En el presente trabajo nos hemos propuesto obtener y caracterizar anticuerpos monoclonales (AcMo) específicos contra antígenos de G. intestinalis, con el fin de evaluar su potencial utilidad en el desarrollo de nuevos métodos inmunoquímicos para el diagnóstico de la infección. Los AcMo se obtuvieron mediante la técinca de hibridización de células somáticas murinas y se empleó un lisado de trofozoítos de la cepa H7 de G. intestinalis como inmunógeno. La selección de los hibridomas obtenidos se por ELISA indirecto. Loa hibridomas fueron clonados por dilución límite y la reactividad de los clones seleccionados se anañlizó por inmunoblotting (IB) y dot-blotfrente a extractos antigénicos obtenidos a partir de trofozoítos y quistes del parásito. Como resultado de la hibridización, se obtuvieron y seleccionaron cuatro hibridomas productores de AcMo específicos, pero solo dos de ellos (clones 3A5 y 4H10) mostraron una alta reactividad por ELISA, por lo cual fueron escogidos para la realización de los ensayos posteriores. El análisis de los perfiles de reactividad por IBmostró que el AcMo 3A5 reconoce un número elevado de bandas de PM inferiores a 83 kDa en los extractos de la cepa H7, mientras que el AcMo 4H10 revela solo dos bandas de 60 y 42 kDa frente al mismo extracto antigénico. Ambos AcMo mostraron perfiles de reactividad similares a los ya descritos frente a extractos antigénicos obtenidos a partir de otras cepas de G. intestinalis (C6 y 1267). Asimismo, el AcMo 4H10 fue capaz de detectar la presencia de antígenos de G. intestinalis en muestra de materia fecal de animales infectados mediante dot-blot. CONCLUSION: Los resultados obtenidos sugieren que los AcMo 3A5 y 4H10 podrían convertirse en herramientas útiles para el desarrollo de métodos de detección de antígenos de G. intestinalis, por ejemplo en el formato de ELISA de captura. Con estas perspectivas, nos proponemos ampliar los estudios de reactividad frente a diferentes aislados, donde también caracterizaremos la eventual reactividad cruzada con otros patógenos intestinales y comenzaremos con la producción y purificación de los AcMo seleccionados.