Estudios In Vitro de un Nuevo Fotosensibilizador Derivado de Porfirina-C60 de Utilidad en Terapia Fotodinámica

M.G.ALVAREZ,C.PRUCCA,M.E.MILANESIO,E.N.DURANTINI,V.RIVAROLA

Mar del Plata

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

   La terapia fotodinámica (TFD) es un método efectivo y selectivo para el tratamiento de tumores. La TFD se basa en el efecto combinado de la luz y un agente fotosensibilizador, el cual puede inducir la muerte celular por apoptosis o necrosis. Dos tipos de mecanismos pueden ocurrir después de la fotoactivación de la porfirina, uno involucra la formación de radicales libres (tipo I) y el otro la generación de oxígeno molecular singlete 1O2 (tipo II). El objetivo de este trabajo fue estudiar los efectos fotodinámicos de una díada (P-C60) con alta capacidad para formar estados de separación de cargas fotoinducido sobre cultivos de células de laringocarcinoma humano (Hep-2). P-C60 se incorpora rápidamente (<4 h) en las células y alcanza un valor de saturación entre las 4 y 24 h (~1,5 nmol/106 células). Los estudios de localización demostraron que la droga se ubica en el área perinuclear principalmente en los lisosomas. Los ensayos de índice de supervivencia (por MTT) han permitido comprobar que en oscuridad P-C60 no afecta la viabilidad hasta  la concentración 1 mM y 24 horas de incubación. Sin embargo, la acción combinada de P-C60 y luz visible induce una disminución significativa (80%) de la supervivencia celular. Además la díada mantiene una fotoactividad alta aún bajo condiciones de atmósfera de argón, demostrando la implicancia de un mecanismo tipo I en el fotodaño de las células. Por tinciones con Hoechst 33258 y Azul de Toluidina de los cultivos de células tratados con P-C60, se encontró que una irradiación de 54 Jcm-2 induce el máximo valor de índice apoptótico (75%) con respecto al total de muertes. Estos resultados fueron confirmados a través de la electroforesis en gel de agarosa y el ensayo TUNEL. Con los resultados obtenidos podemos concluir que P-C60 reúne propiedades fotobiológicas adecuadas para su aplicación en tratamientos fotodinámicos mediante TFD.