Identificación molecular de bacterias endosimbiontes asociadas a pulgones argentinos autóctonos del género Aphis.

ARNEODO, J. D.; ORTEGO, J

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología y II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

Los áfidos desarrollaron relaciones simbióticas con diversos microorganismos, principalmente bacterias. Aquellas bacterias que viven dentro del cuerpo de su hospedador son consideradas endosimbiontes. La microbiota de los áfidos sudamericanos es aún desconocida, ya que estos estudios se encuentran restringidos a insectos originarios del hemisferio Norte. No obstante, dichos microorganismos (o sus productos) constituyen un recurso biológico de potencial aplicación en la industria, la medicina o la protección de cultivos, ya sea a partir de la identificación de enzimas útiles o mediante su manipulación biotecnológica para controlar a sus insectos hospedadores plagas. Los endosimbiontes se clasifican en primarios (1°) o secundarios (2°) según su grado de interdependencia con el hospedador. Buchnera aphidicola, el endosimbionte 1°, se encuentra en todas las especies, aportando aminoácidos esenciales a la dieta. Los endosimbiontes 2° no son indispensables para la vida de sus hospedadores, si bien a menudo les aportan beneficios. Las bacterias Hamiltonella defensa y Serratia symbiotica, por ejemplo, participan en la defensa frente a parasitoides y estrés térmico, respectivamente. El objetivo de este trabajo fue la caracterización molecular de la microbiota bacteriana asociada a pulgones argentinos del género Aphis. Para ello, se colectaron ejemplares de 7 especies nativas pertenecientes a dicho género en la precordillera de Mendoza (Argentina), extrayéndose individualmente el ADN total de cada áfido. Una vez corroborada la presencia de B. aphidicola en todas las muestras por PCR con cebadores específicos, se procedió a detectar bacterias endosimbiontes 2° con los cebadores universales para eubacterias 10F/480R, que amplifican casi todo el gen 16S rRNA, parte del 23S y el espacio intergénico (IGS) de la mayoría de los taxones bacterianos excepto Buchnera, donde el gen 16S no está unido al 23S por un IGS. Los productos (de aprox. 2,5 kb) fueron digeridos con enzimas de restricción para detectar posibles diferencias entre los amplicones resultantes de cada especie, no hallándose variaciones intraespecíficas pero sí interespecíficas. Los productos de 10F/480R se clonaron en un vector y se transformaron bacterias DH5α, se purificó el ADN plasmídico y se secuenciaron de 1 a 4 clones por especie de áfido. Se demostró la ocurrencia de S. symbiotica en A. senecionicoides, A. malalhuina y A. schinifoliae, mientras que H. defensa fue encontrada infectando A. mendocina. En A. danielae no se pudo encontrar ninguna bacteria endosimbionte 2°. En tanto, una bacteria del género Arsenophonus (muy poco frecuente en áfidos) fue detectada en A. melosae y en Aphis sp. en proceso de identificación colectado sobre Adesmia pinifolia. Este último grupo de bacterias, que incluye no solo endosimbiontes de insectos sino también algunos patógenos vegetales, ha sido objeto de creciente interés en los últimos años debido a sus características biológicas y filogenéticas.