Síndrome de abstinencia a morfina y prevención con baclofen: niveles de monoaminas y sus metabolitos en distintas áreas cerebrales

S.L. DIAZ, A.K. KEMMLING Y G.N. BALERIO

Buenos Aires

Jornada; Jornadas Científicas 2000.; 2000

Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica

Síndrome de abstinencia a morfina y prevención con baclofen: niveles de monoaminas y sus metabolitos en distintas áreas cerebrales. S.L. Diazab, A.K. Kemmlingab y G.N. Balerioab. Cátedra de Farmacologíaa, Facultad de Farmacia y Bioquímica, (UBA) e ININFAb (CONICET), Junín 956, 5º piso (1113), Buenos Aires, Argentina. Introducción En estudios previos hemos analizado los signos conductuales del síndrome de abstinencia a morfina (MOR), agonista selectivo de los receptores opioides y hemos demostrado que el agonista GABAB, baclofen (BAC) previno estos signos conductuales (Kemmling y col., 1997). La MOR induce cambios en regiones específicas del SNC, los cuales son relevantes en ciertos aspectos de la adicción. En el área tegmental ventral (VTA), la MOR inhibe interneuronas GABAérgicas vía receptores m, desinhibiendo de este modo las neuronas dopaminérgicas e incrementando la liberación de dopamina (DA) en el nucleo accumbens y en otras áreas (Di Chiara y col., 1992). Además, los mecanismos neuroquímicos implicados en el desarrollo de la dependencia a opiáceos y en la expresión del síndrome de abstinencia incluyen procesos de regulación homóloga que afectan a otros sistemas de neurotransmisión (Koob y col., 1988). La mayoría de los estudios realizados acerca de los niveles de dopamina (DA) y sus metabolitos durante el tratamiento con MOR y su síndrome de abstinencia, reportan resultados contradictorios. Algunos autores hallaron un aumento en la utilización de DA en sustancia nigra (Gianutsos y col., 1974), cuerpo estriado (Lal, 1975) y núcleo accumbens (Kovacs y col., 1983) durante el síndrome de abstinencia a MOR, mientras que otros estudios reportan resultados opuestos en sustancia nigra y VTA (Kovacs y col., 1983) y en el cuerpo estriado (Nowycky y col., 1978). La participación de la serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT) en el síndrome de abstinencia a MOR también resulta controvertida. Por un lado, se vio que los receptores de 5-HT están involucrados en la expresión del síndrome de retirada (el-Kadi y Sharif, 1995), pero también se reporta que en la abstinencia a MOR precipitada por naloxone (NAL) no se altera el nivel de serotonina y de ácido 5-hidroxiindolacético (5-HIAA) (Tokuyama y col., 1996). Con respecto a la acción del BAC, el sistema GABAérgico parecería tener cierta acción sobre las neuronas dopaminérgicas (Yoshida y col., 1994; Kabuto y col., 1988) pero no actuaría sobre las neuronas serotoninérgicas (Kabuto y col., 1988). El objetivo de este estudio es analizar las variaciones neuroquímicas en distintas regiones del cerebro del ratón durante el síndrome de abstinencia a MOR y su prevención con BAC. Materiales y métodos Tratamiento experimental: se utilizaron ratones macho Swiss-Webster albino entre 20 y 30 g de peso, los cuales fueron tratados con MOR (2 mg/kg, i.p.) dos veces al día, durante 9 días consecutivos (tiempo necesario para desarrollar la adicción). El día del experimento (día 10) este pool de animales dependientes fue dividido en 2: a un grupo se le provocó el síndrome de abstinencia, 1 h después de haberle dado la última dosis de MOR, mediante la administración de NAL (6 mg/kg, i.p.) (GRUPO ABSTINENCIA). Al resto de los animales, después de la última dosis de MOR se les administró BAC (2 mg/kg, i.p.) 30 min antes de la administración de NAL (GRUPO PREVENCION). Otro pool de animales recibió solución fisiológica (SF, i.p.) 2 veces al día durante 9 días y el día del experimento se le administró SF 1 h después de la última inyección de SF (GRUPO CONTROL). Determinación neuroquímica: la determinación neuroquímica se llevó a cabo mediante HPLC con detección electroquímica (voltaje de oxidación: 700 mVoltios) (Heikkila y col., 1984). Luego de 10 minutos de recibir la última droga correspondiente según su grupo experimental se sacrificaron los animales, se extrajeron sus cerebros y se disecaron el cuerpo estriado, la corteza frontal y el hipocampo de cada uno. Estas áreas fueron luego pesadas, homogeneizadas y desproteinizadas en ácido perclórico 0.2N (1/20 mg/ml). Estos homogenatos fueron centrifugados y los sobrenadantes inyectados (50 ml) en un sistema cromatográfico con una columna de fase reversa C18 (Waters) de 12.5 cm y con una fase móvil compuesta por NaH2PO4.H2O 0.076M; Pic B8 5.24 ml/L, con apareante iónico; EDTA 0,99 nM y 6% Metanol. Se determinaron las concentraciones endógenas de DA y sus metabolitos ácido 3,4-dihidroxifenilacético (DOPAC) y ácido homovanílico (HVA) y también de 5-HT y 5-HIAA. Las alturas de los picos fueron analizadas por el integrador DATA Jet (Spectra-Physics) y cuantificadas basándose en curvas standard utilizando el programa DATAFIT. Resultados Los siguientes gráficos muestran los resultados obtenidos en las distintas áreas estudiadas en las cuales se han observado diferencias significativas en las concentraciones de aminas biógenas entre los grupos experimentales. Cada barra representa la media ± S.E.M. de al menos 6 ratones por grupo. No se observaron diferencias significativas en los niveles de serotonina y su metabolito entre los grupos experimentales en las áreas estudiadas. No se muestran los datos de las áreas en las cuales no hubo diferencias significativas entre los grupos experimentales. ·         Los niveles de DA en el grupo abstinencia disminuyeron 49.3% vs. el grupo control. ·         Los niveles de DA en el grupo prevención aumentaron 51.2% vs. el grupo abstinencia. (ANOVA, Newman-Keuls test ***p<0.001 y *p<0.05). ·         Los niveles de DOPAC en el grupo abstinencia disminuyeron 67.9% vs. el grupo control. ·         Los niveles de DOPAC en el grupo prevención aumentaron 145.6% vs. el grupo abstinencia. (ANOVA, Newman-Keuls test **p<0.01). ·         Los niveles de HVA en el grupo abstinencia disminuyeron 34.2% vs. el grupo control. ·         No se hallaron diferencias significativas en los niveles de DA entre los grupos prevención y abstinencia. (ANOVA, Newman-Keuls test **p<0.01). ·         Los niveles de DA en el grupo abstinencia disminuyeron 63.1% vs. el grupo control. ·         Los niveles de DA en el grupo prevención aumentaron 198.2% vs. el grupo abstinencia. (ANOVA, Newman-Keuls test *p<0.05). Discusión Nuestros resultados sugieren que una disminución en la actividad de las neuronas dopaminérgicas, la cual se ve reflejada por una reducción de los niveles de DA y DOPAC en regiones específicas del cerebro, jugaría un importante rol en la expresión del síndrome de abstinencia a MOR. En contraposición, la neurotransmisión serotoninérgica no estaría involucrada en la expresión del síndrome de abstinencia a MOR. El BAC tendería a reestablecer la actividad de las neuronas dopaminérgicas en el síndrome de abstinencia a MOR. Bibliografía Kemmling AK, Balerio GN and Rubio MC: APPTLA, 75 (47) 4, 49, 1997. Di Chiara G and North AR: TIPS, 13 (5), 185-193, 1992. Koob GF and Bloom FE: Science, 242, 715-723, 1988. Gianutsos G, Hynes MD y Puri SK: Psychopharmacologia, 34, 37-44, 1974. Lal H: Life Science, 17,483-495, 1975. Kovacs GL, Acsal L, Tihanyi A and Telegdy G: Eur J Pharmacol, 93, 149-158, 1983. Nowycky MC, Walters JR and Roth RH: J Neural Trans, 42, 99-116, 1978. el-Kadi AO and Sharif SI: Life Science, 57 (5), 511-516, 1995. Tokuyama S, Wakabayashi H, Hoskins B and Ho IK: Pharmacol Biochem Behav, 54 (2), 461-468, 1996. Yoshida M, Yokoo H, Tanaka T, Emoto H and Tanaka M: Brain Res, 636 (1), 111-114, 1994. Kabuto H, Yokoi I and Mori A: Neurochem Res, 13 (12), 1157-1161, 1988. Heikkila RE, Hess A and Duvoisin RC: Science, 224, 1451-1453, 1984.