Caracterizacón del proteoma de las células germinales de Echinococcus granulosus cultivadas en medio suplementado y en medio axénico

ALBANI CM, REINDERS J, ELISSONDO MC.

Santa Fe

Congreso; XXX Jornadas Nacionales de Hidatidosis; 2015

Asociación Internacional de Hidatidología, filial Argentina Ministerio de Salud de la Provincia de Santa Fe Universidad Nacional del Litoral.

INTRODUCCION: Las células germinales de Echinococcus granulosus (Eg) representan la única población celular proliferativa a partir de la cual se desarrollan todos los tipos celulares diferenciados. Es por esta razón que representan un modelo interesante para el estudio de los procesos que subyacen la gran capacidad proliferativa de Eg y el mantenimiento exitoso de la relación parásito-hospedador por largos periodos de tiempo, generando oportunidades para el desarrollo de nuevas estrategias de control de la enfermedad. OBJETIVO: El objetivo del presente trabajo fue caracterizar el proteoma de las células germinales de Eg cultivadas en 2 condiciones: medio suplementado con agentes reductores y antibióticos; y medio axénico suplementado con productos de excreción del hospedador. METODOLOGÍA: Se empleó una línea celular de Eg previamente establecida. Se sembraron 5x105 células germinales de Eg por cada pocillo y se agregaron 2 ml del medio de cultivo condicionado producto del cultivo de hepatocitos o 2 ml de medio suplementado con agentes reductores y antibióticos como condición control. Luego de 4 semanas se colectaron las células en tampón fosfato de sodio 2 mM y 2% SDS y se realizó la extracción, cuantificación y digestión de las proteínas presentes. Los péptidos resultantes fueron analizados mediante cromatografía líquida asociada a espectrometría de masa (nano-LC-MS/MS). RESULTADOS: Se identificaron un total de 455 proteínas presentes en ambas condiciones ensayadas, de las cuales 129 pertenecieron a Eg y 326 correspondieron al hospedador. Con respecto a la localización subcelular de las proteínas de Eg se determinó que el 42% presentaron una localización citoplasmática, el 28% mitocondrial, el 15% fueron proteínas plasmáticas y el 12% correspondieron a proteínas secretadas. Se realizó un análisis de ontología génica a través del cual se determinó que 92 proteínas fueron asignadas a la categoría función molecular, 67 a la categoría componente celular y 85 a la categoría proceso biológico. Finalmente se identificaron las proteínas reguladas en ambas condiciones estudiadas y se evaluó su participación en procesos de desarrollo, diferenciación, proliferación, etc. CONCLUSIONES: Mediante la metodología empleada fue posible determinar un gran número de proteínas presentes en las células germinales de Eg e hipotetizar su posible función.