Optimizaci6n del cultivo in vitro en direccion vesicular de Echinococcus granulosus

ELISSONDO MC, PENSEL P, DENEGRI, G.

San Salvador de Jujuy

Congreso; XXXIV Jornadas Internacionales de Hidatidología; 2011

Filial Argentina de la Asociación Internacional de Hidatidología

Los modelos de cultivo in vitro del cestode Echinococcus granulosus fueron originalmente desarrollados por Smyth en la década de 1960. La evolución en dirección vesicular, con la subsecuente obtención in vitro de microquistes tiene por un lado la ventaja de permitir la obtención de quistes sin requerir de un modelo animal, lo que ahorra tiempo y costos. Los microquistes pueden ser utilizados para el desarrollo de pruebas de fármacos, como así también, constituye un criterio de viabilidad del material parasitario. En trabajos previos se puso a punto el modelo de evolución en dirección vesicular de protoescólices de E. granulosus de origen bovino. Uno de los problemas que suelen presentarse son los bajos porcentajes de microquistes por tubo (1-3%). El objetivo de este trabajo fue optimizar el cultivo en dirección vesicular de E. granulosus y aumentar la obtención de microquistes. Se utilizaron protoescólices extraídos de quistes hidatídicos localizados en hígado y pulmón de bovinos. Los quistes se punzaron y se extrajo la arenilla hidatídica. Los protoescólices se lavaron varias veces con PBS, se comprobó la vitalidad con azul de metileno y se distribuyeron en Tubos Leighton a razón 10 µl de protoescólices por cada 10 ml de medio 199. Para la inducción del desarrollo en dirección vesicular se trabajó con las condiciones de cultivo establecidas por Elissondo et al. (2004) adicionando insulina a diferentes concentraciones. Se complementó el medio con suero fetal bovino (20%), glucosa, y antibióticos. El desarrollo se siguió diariamente bajo microscopio invertido y se apuntaron las modificaciones morfológicas observadas. Se estableció el tiempo de evolución en días hasta la formación de microquistes. En los cultivos in vitro se comprobó a partir del día 11 la aparición de la membrana laminar como una fina membrana en uno de los extremos de los protoescólices. Luego de 14 días se observaron algunos protoescólices con un tamaño mucho mayor con la membrana laminar completa y a los 20 días se observaron microquistes totalmente desarrollados. Se logró aumentar el rendimiento aproximadamente un 11% por tubo y el tamaño de los microquistes obtenidos. Se logró optimizar el modelo de cultivo in vitro en dirección vesicular. La insulina ha permitido acortar considerablemente los tiempos de evolución y el aumento del rendimiento es importante a la hora de evaluar la actividad antihelmíntica de diferentes fármacos sobre este estadío del parásito y estudiar sus mecanismos de acción en tiempos más cortos.