Purificación y propiedades moleculares de la glutatión reductasa de trigo

D.A. CONVERSO; M.D. GROPPA; I. MARTINEZ; M.L. TOMARO

Mendoza, Argentina

Congreso; XXXV Reunión Anual de SAIB.; 1999

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular

La glutatión reductasa (GR) es una flavoproteína que cataliza la reducción del glutatión disulfuro (GSSG) a glutatión (GSH) utilizando NADPH. La GR es una de las enzimas primarias en la defensa antioxidante de las plantas, siendo responsable del mantenimiento del balance GSH/GSSG y por consiguiente, resultando una enzima clave para asegurar a la célula una alta concentración de GSH. El objetivo de este trabajo consistió en purificar a homogeneidad la glutatión reductasa presente en la semilla de trigo y estudiar sus características cinéticas y estructurales. Se realizaron geles de poliacrilamida de extractos de semillas de trigo revelándose mediante tinción específica una única isoforma de GR, la cual se purificó  a homogeneidad mediante técnicas clásicas y FPLC. El peso molecular se determinó tanto en condiciones nativas (utilizando tamices moleculares) como en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE). En ambos casos se obtuvo un PM de 44000. Mediante isoelectroenfoque se determinó el punto isoeléctrico de la enzima que resultó ser igual a 7,2. El espectro d absorción UV-visible presentó dos máximos a 370 y 460 nm. Además, se estudió la fluorescencia intrínseca de la enzima. Su máximo de emisión se ubicó a 338 nm tanto al excitar a 278 nm como a 295 nm, lo que indicó que la fluorescencia de esta enzima es debida principalmente al/los triptofanos, no observándose contribución de residuos de tirosina a la misma. Los resultados obtenidos indicaron que en la semilla de trigo se expresa una única isoforma de GR con características espectroscópicas de flavoproteína, la cual a diferencia de la enzima de origen animal, resultó ser un monómero.