Participación del óxido nítrico en la modulación de la actividad de la nitrato reductasa de trigo

ROSALES E.P.; IANNONE M.F.; GROPPA M.D.; BENAVIDES M.P.

Congreso; XXVIII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal.; 2010

Las poliaminas (PAs) son compuestos nitrogenados relacionados con el crecimiento, la muerte celular y la respuesta al estrés. En experimentos previos se observó que 1 mM de putrescina (Put), espermidina (Spd) y espermina (Spm) aumentan la formación de O2.- y H2O2 y la muerte celular en hojas de tabaco a las 24 h de tratamiento. El objetivo de este trabajo fue evaluar la participación de la NADPH oxidasa en la generación de O2.- y de la catalasa (CAT) en la remoción del H2O2, evaluando la actividad enzimática, la expresión de los genes cat1 y Ntrboh.y el contenido proteico de catalasa por WB. Los discos de hojas de Nicotiana tabacum cv SR1 de plantas de 60 d se tratados con 0.1 o 1 mM de Put, Spd o Spm. por 2 y 24 h. Las 3 PAs aumentaron la expresión de NADPH oxidasa a las 2 h, pero la disminuyeron a las 24 h, excepto la Spm 1 mM. Sin embargo, la actividad de la enzima disminuyó entre un 50% y 80%, con ambas concentraciones de las 3 PAs, a las 2 y 24h. La expresión génica de CAT aumentó a las 2 h con 1 mM de las 3 PAs, disminuyó con 0.1 y 1 mM a las 24 h. Al igual que lo observado con NADPH oxidasa, la actividad de CAT cayó a las 2 h con las 3 PAs, recuperándose a las 24 h, excepto para Spd y Put 1 mM. La expresión proteica de CAT aumentó 50 y 30%, a las 2 h, con Put 1mM y Spm 0.1 mM, respectivamente, pero a las 24 h decayó significativamente con 0.1 y 1 mM de Spd y Spm. Estos resultados muestran que a tiempos cortos, las 3 PAs muestran un mecanismo de acción similar sobre la NADPH oxidasa y CAT, modulando positivamente la expresión génica pero negativamente la actividad de ambas enzimas, lo cual indicaria una regulación post-transcripcional de la actividad enzimática o una acción directa sobre la enzima. A tiempos más largos, la Spm (1mM) mostró un efecto opuesto al de la Put en cuanto a la expresión génica de la NADPH oxidasa y la expresión proteica de la CAT, por lo cual la inducción de la formación y detoxificación de ROS en tabaco podría estar regulado diferencialmente por las distintas PAs.