ROL DE LOS AGONISTAS PPARgamma EN LA REGULACIÓN DE LA SOBREVIDA DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS.

D’ATRI, LINA P.; PACIENZA, NATALIA; POZNER, ROBERTO G.; NEGROTTO, SOLEDAD; MALAVER, ELISA; LAZZARI, MARIA A.; TORRES, OSCAR; GOMEZ, RICARDO M.; SCHATTNER, MIRTA

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XX Congreso del CLAHT – VIII Congreso del CAHT; 2008

Grupo CLAHT – Grupo CAHT

Previamente demostramos que ligandos del PPARg como el endógeno 15d-PGJ2 (PGJ) y el sintético, ciglitazona (CGZ), inhiben la proliferación de precursores megacariocíticos por arresto del ciclo celular y apoptosis. Con el fin de profundizar estos hallazgos se analizó el efecto de ambas drogas en la formación de colonias megacariocíticas en cultivos semisólidos utilizando células CD34+ aisladas de sangre de cordón umbilical mediante inmunoselección magnética. El número de colonias disminuyó de manera concentración dependiente (n=3) por el tratamiento de las células CD34+ con ambas drogas. Con el fin de estudiar si este efecto era específico del linaje megacariocítico, células CD34+ fueron expandidas con EPO, IL3, SCF, G-CSF o GM-CSF en presencia de PGJ/CGZ. Posteriormente se evaluó viabilidad celular y apoptosis mediante el ensayo de MTT y microscopía de fluorescencia respectivamente. Ambos agonistas indujeron una disminución en la viabilidad celular asociada con un incremento significativo en los niveles de apoptosis independientemente del factor de crecimiento. El efecto de PGJ o CGZ en la capacidad formadora de colonias granulo/monocíticas, eritroides o mixtas de las células CD34+ se confirmó en ensayos clonogénicos en metilcelulosa. Se observó una marcada disminución en el número total de colonias obtenidas (control=66±5, PGJ=27±6*, CGZ=13±5*, n=3, p<0,001 vs control) sin distinción entre los linajes. Considerando que PGJ y CGZ actúan por mecanismos dependientes e independientes del PPARg, analizamos la acción de un inhibidor específico de este factor de transcripción (GW9662) o del NF-kB (BAY 11-7082). La apoptosis mediada por PGJ no fue modificada por el tratamiento con GW9662, pero aumentó significativamente en presencia del BAY (C=10±1, BAY=19±3, PGJ=22±5, ambos=33±6, n=5, p<0,05). Los mecanismos apoptóticos inducidos por ambas drogas incluyen la activación de la vía intrínseca o mitocondrial dado que se observó una disminución del potencial de membrana mitocondrial, una menor expresión de Bcl-xL y activación de caspasa-3 (citometría de flujo). En conjunto estos datos muestran que la PGJ y la CGZ no solo inhiben el crecimiento de megacariocitos sino que también tienen un efecto regulador negativo de la hematopoyesis asociado a una acción indirecta sobre el factor de transcripción NF-kB. Estos hallazgos serían un aspecto a considerar en el uso terapéutico de la CGZ como hipoglucemiante y del emergente uso de ambas drogas como antineoplásicos.