LA ACIDOSIS EXTRACELULAR PROMUEVE LA APOPTOSIS DE CÉLULAS MADRE HEMATOPOYÉTICAS.

D’ATRI, LINA P.; MALAVER, ELISA; POZNER, ROBERTO G.; PACIENZA, NATALIA; NEGROTTO, SOLEDAD; TORRES, OSCAR; GOMEZ, RICARDO M.; SCHATTNER, MIRTA

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XX Congreso del CLAHT – VIII Congreso del CAHT; 2008

Grupo CLAHT – Grupo CAHT

Las células madre hematopoyéticas (CD34+) han sido tradicionalmente utilizadas para el transplante de médula ósea. Sin embargo, investigaciones recientes señalan que las mismas también tendrían un alto potencial de uso clínico en medicina regenerativa incluyendo la revascularización y regeneración celular en pacientes con infarto de miocardio o accidente cerebrovascular. La isquemia, así como el proceso inflamatorio o el desarrollo tumoral se caracterizan por generar un microambiente acídico. La acidosis extracelular es un regulador crítico de respuestas de activación y sobrevida de diferentes tipos celulares. En este trabajo evaluamos el impacto del medio ácido en la sobrevida de células CD34+. Las células fueron obtenidas de sangre de cordón umbilical por inmunoselección magnética positiva. El análisis por microscopia de fluorescencia mostró que la exposición a un medio ácido (pH6,5) durante 48 horas aumentó significativamente la apoptosis de células CD34+ (pH7,4: 18±4, pH6,5: 60±5% n=9). La inducción de muerte celular programada fue confirmada por un aumento significativo de células positivas para anexina-V (pH7,4: 20±2, pH6,5: 70±5 %, n=3) y de células hipodiploides (pH7,4: 12±2, pH6,5: 50±5%, n=3). Es conocido que algunos factores de crecimiento hematopoyéticos exhiben, además de su actividad proliferativa, un efecto antiapoptótico y que durante la isquemia se produce un aumento significativo de factores que promueven la angiogénesis y el reclutamiento de progenitores endoteliales y hematopoyéticos. Tanto TPO (100 ng/ml) como SCF (100 ng/ml) o IL-3 (20 ng/ml) inhibieron la apoptosis de células CD34+ gatillada por el medio ácido (C: 60±5, TPO: 35±4, SCF: 29±4, IL-3: 10±4, p<0.05 vs C, n=6). Otras citoquinas como VEGF (10-100 ng/ml), SDF-1 (10-500 ng/ml), EPO (2 U/ml) o GM-CSF (20-100 ng/ml) no tuvieron efecto. Entre los mecanismos involucrados en la inducción de apoptosis por el medio ácido se encuentra la activación de la vía intrínseca o mitocondrial ya que la exposición de células CD34+ a pH 6,5 disminuyó el potencial de membrana mitocondrial, los niveles de la proteína antiapoptótica Bcl-xL (pH7,4: 90±5; pH6,5: 63±5 % de células positivas n=3) y promovió la activación de caspasa-3 (pH7,4: 19±2; pH6,5: 57±9; TPO (pH6,5): 37±5 % de células positivas para el fragmento activo de la caspasa-3, n=3, citometría de flujo). Estos hallazgos demuestran que la acidosis extracelular promueve la apoptosis de células CD34+ y que este efecto citotóxico puede ser prevenido dependiendo de las citoquinas presentes en el microambiente acídico.