REGULACIÓN DE LA SOBREVIDA DE CÉLULAS MADRES HEMATOPOYÉTICAS MEDIADA POR AMPC.

PACIENZA, NATALIA; NEGROTTO, SOLEDAD; D´ATRI, LINA P.; MALAVER, ELISA; POZNER, ROBERTO G.; TORRES, OSCAR; LAZZARI, MARIA A.; GOMEZ, RICARDO M.; SCHATTNER, MIRTA

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; L Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2005

SAIC.

Previamente demostramos que el AMPc inhibe la apoptosis de células madres hematopoyéticas (CD34+ derivadas de cordón umbilical humano) inducida por deprivación de suero (SS) inhibiendo la activación de caspasa-3 y la downregulation de Bcl-xL. En este trabajo profundizamos las vías de señalización involucradas. La apoptosis se evaluó luego de 48 horas por microscopía de fluorescencia y citometría de flujo. La SS durante 15 hs provocó un aumento en el porcentaje de células con disrupción de la membrana mitocondrial (C: 6±2, SS: 34±3, BIMPS: 3±1 %, p<0.05, n=3) que fue completamente inhibido por el análogo de AMPc, BIMPS (5 uM). La inhibición de la PKA con Rp-cAMP (50 uM) suprimió la acción antiapoptótica del AMPc (C: 11±1, SS: 44±2, BIMPS+SS: 28±1, Rp-cAMP+BIMPS+SS: 41±2 % de células apoptóticas, p<0.05, n=4). El pretratamiento con inhibidores específicos de la PI3K como LY294002 (10 uM) y Wortmanina (0.1 ug/ml) mostraron resultados similares (47±3, 42±1 %, p<0.05, n=4). Por otro lado,  la vía de las MAPK no participaría ya que el inhibidor PD098059 (1-100 uM) no tuvo efecto. Considerando que TPO y G-CSF promueven la sobrevida celular, evaluamos el papel del AMPc como mediador de este proceso. Mientras que el BIMPS potenció la citoprotección mediada por TPO (20 ng/ml) y G-CSF (20 ng/ml) (C: 11±1, SS: 47±4, TPO+SS: 20±2, G-CSF+SS: 22±2, BIMPS+SS: 28±3, TPO+BIMPS+SS: 11±1 %, G-CSF+BIMPS+SS: 10±1 %, p<0.05, n=6), la inhibición de la adenilato ciclasa con SQ 22536 disminuyó significativamente la acción antiapoptótica de ambos (TPO: 44±4, G-CSF: 42±5 %, p<0.05, n=6). Sin embargo, la TPO o el G-CSF no aumentaron los niveles de AMPc intracelulares (n=3). La activación de la PKA y PI3K así como la inhibición de la pérdida de potencial de membrana de la mitocondria forman parte de la vía antiapoptótica del AMPc y señalan que la citoprotección mediada por TPO y G-CSF requiere de niveles basales de este nucleótido.