LOS NUCLEÓTIDOS CÍCLICOS REGULAN LA APOPTOSIS DE MEGACARIOCITOS INDUCIDA POR ÓXIDO NÍTRICO.

POZNER, ROBERTO G.; NEGROTTO, SOLEDAD; GOMEZ, RICARDO M.; D´ATRI, LINA P.; MAUGERI, NORMA; LAZZARI, MARIA A.; SCHATTNER, MIRTA

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; XLVIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) / LI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI).; 2003

SAIC/SAI.

Previamente demostramos que la prostaciclina (PGI2) previene la apoptosis de megacariocitos (MCs) inducida por óxido nítrico (ON). En este trabajo estudiamos los mecanismos involucrados. Los MCs se purificaron por inmunoselección magnética positiva luego de 10-12 días de cultivo de células CD34+ de sangre de cordón umbilical humano estimulados con trombopoyetina (TPO). La apoptosis se evaluó por microscopía de fluorescencia y citometría de flujo. Tanto el Dibutiril-cAMP (análogo del cAMP) como los inhibidores de fosfodiesterasas IBMX y Ro-20-1724 mostraron niveles de protección similares a los de PGI2 frente a la inducción de apoptosis por DETA/ON (C: 14±3, ON:51±7, PGI2+ON:25±3, Dib-cAMP+ON:32±4, IBMX+ON:28±5, Ro-20-1724+ON: 34±3 % de apoptosis (ap), n=5). La inhibición de la PKA mostró una reversión parcial aunque significativa de la protección por PGI2 (36±3 % ap, n=4). Por otra parte, la TPO protegió la apoptosis inducida por ON y potenció la actividad antiapoptótica de la PGI2 (24±2 y 14±1 % ap respectivamente, n=3). Los niveles de cAMP y cGMP fueron determinados por ELISA (n=3): cAMP (nM) cGMP (nM) Control 0.21 ± 0.07 1.12 ± 0.34 ON 0.44 ± 0.09 4.03 ± 0.79 PGI2+ON 5.03 ± 0.72 0.60 ± 0.18 TPO+ON 2.51 ± 0.24 1.65 ± 0.21 El 8-Br-cGMP indujo apoptosis en forma concentración dependiente y el inhibidor de guanilato ciclasa ODQ previno la apoptosis inducida por ON (ODQ+ON: 37±3) demostrando la implicancia del cGMP en el mecanismo de muerte de MCs mediada por ON. En contraposición a su efecto en plaquetas, los dos principales inhibidores de la función plaquetaria, el ON y la PGI2, gatillan respuestas opuestas en MCs involucrando una relación de los nucleótidos cíclicos del tipo yin-yang.