Inducción del promotor de citomegalovirus CMV en linfomas T murinos

RUYBAL PAULA; PERIOLO NATALIA; BARCALA VIRNA; GRAVISACO MARÍA JOSÉ; CREMASCHI GRACIELA; WALDNER CLAUDIA; MONGINI CLAUDIA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLVII Reunión anual de la SAIC, L Reunión anual de la SAI; 2002

Sociedades Argentinas de Investigación Clínica e Inmunología

Este trabajo evalúa el efecto del PMA y la Ionomicina en la proliferación celular y en la inducción del promotor viral CMV en los linfomas murinos LBC; EL-4 y BW5147. Las células fueron transfectadas por electroporación con el plásmido pQBI25 que codifica para la GFP- El efecto del PMA sobre la proliferación celular se midió por el método de reducción del MTT. Las células tumorales LBC, LBC-GFP, EL-4 y BW5147 fueron incubadas durante 20 h con Ionomicina (0.25 y 0.5 uM), PMA (5-20 ng/ml) y diferentes combinaciones. Se observó un aumento significativo en la proliferación en todos los casos con ionomicina 0.25 u}M + PMA 5 ng/ml (índice de proliferación (IP): 2.7; 4; 1.8 respectivamente) y con PMA 5 ng/ml (IP: 1.8; 3.6; 2.1; 1.9; repectivamente), respecto del control. En los experimentos de inducción del promotor CMV, se observó un aumento significativo en la expresión del GFP respecto al control en células LBC, EL-4 pero no en la línea BW5147 incubadas con 10 ng/ml PMA con o sin ionomicina 0.5 uM durante 24 h, por microscopia de fluorescencia y citrometría de flujo. El tratamiento con PMA aumentó la proliferación de las tres líneas tumorales e indujo la expresión de la GFP en las células EL-4 y LBC. Las líneas derivadas de LT poseen en general baja eficiencia de transfección y el promotor CMV (comúnmente utilizado en vectores eucariotas) es de baja expresión en estas líneas, el tratamiento con PMA sería una herramienta importante para obtener una mayor expresión del transgen.